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实验四细菌的划线分离与培养

实验四细菌的划线分离与培养

一、实验前要说明的几点问题

点名,查看学生出勤情况。总结上次作业，提出作业中出现的问题

并讲解。

二、板书部分

（一）目的要求

1.掌握需氧菌分离培养的基本要领。

2.了解厌氧菌的分离培养原则及方法。

（二）实验容

1.用普通琼脂平板做一次划线分离培养。

2.用普通肉汤做一管大肠杆菌的移植培养。

3.用普通琼脂斜面做一管金黄葡萄球菌的移植培养。

4.用划线法进行真菌的分离培养（示教）

（三）作业

1.为什么要进行细菌的分离培养？

2.进行分离培养应注意哪些事项？

3.细菌分离培养的方法有哪些？（重点叙述平板划线法）

4.叙述真菌的划线分离方法。

三、实验容

主要容有分离培养及目的、注意事项、分离培养的方法、真菌的

培养方法、患病动物病料中分离培养、钓菌、移植。

1.什么是分离培养及目的：分离培养是细菌学检验的基本技术之

一。分离培养之目的，在于从被检材料中由多种细菌里分离出一种细

菌。

2.注意事项：

1）分离培养前应考虑所分离的细菌的特性，选择适合其生长需要

的培养基（需氧还是厌氧、营养的要求高还是不高、培养温度等）等。

例如：链球菌在普通琼脂不长，要加血清或血液。大肠杆菌和葡萄球

菌要求较低，普通的培养基即可生长。

2）防止污染。分离培养的整个过程要严格无菌操作。培养基和一

切用具必

须彻底灭菌；操作时必须靠近火焰；操作完毕后，禁止再让培养

基接触外界空气。

3）防止接种器械过热，很容易杀死分离培养的细菌，如接种环在

烧灼灭菌后，不能立即钓取细菌材料，应在酒精灯旁凉凉；另外还应

注意防止已钓取菌料的接种环，不慎通过火焰而将细菌杀死。

4）初代分离时发现有多种细菌，观察找到目的菌落，再拿一肉汤

培养基纯化培养。然后在接种实验动物，作成凝集抗原，做血清学鉴

定，。还可以反过来做抹片染色观察。

3.分离培养的方法：

主要分需氧菌的分离培养方法、厌氧菌的分离培养方法和需要CO

菌的培养分离方法。

1）需氧菌的分离培养法

（1）平板划线法：划线后有单个菌落，便于观察菌落的形态、溶

血性等。方法左手拿琼脂平板，使其与水平面成45。角；右手拿铂金

耳，使之与水平面平行，靠近酒精灯火焰操作。将接种环于酒精灯火

焰中灼烧灭菌，待其冷却后，蘸取欲检材料少许，注意不要划破琼脂，

不要划得太疏，以免造成浪费，不要重复划线，以免形成菌苔。划线

方法：方格划线、蛇形划线、区域划线、交叉划线，选择其中一种进

行划线。划毕，将接种环烧灼灭菌，于皿底用蜡笔标记被检材料名称

及日期，倒转置恒温箱中培养。

思考题：方格划线哪个地方会长出单个菌落比较多？

（2）倾注法：不常用，这里不做介绍

2）厌氧菌的分离培养方法

厌氧菌生长繁殖的环境不能有游离氧的存在。故在培养厌氧菌时，

必须创造一个厌氧环境，一般以降低氧的力或保持减低的氧力为原则。

目前应用于厌氧菌的分离方法颇多，现就其中较简便且常用的几种方

法介绍如下：

（1）焦性没食子酸法利用焦性没食子酸在碱性溶液能大量地吸收

氧的原理进行厌氧培养。通常100cm3空间用焦性没食子酸1g，10%

氢氧化钠或氢氧化钾10ml。具体方法有下列有平板培养法、干燥器培

养法。平板培养法是将厌氧菌划线接种于适宜的琼脂平板，取一小团

直径约2cm的脱脂棉，置于平皿盖的面中央，其上滴加10%氢氧化钠

溶液约5ml；在靠近脱脂棉的一侧放置焦性没食子酸约

0.5g,注意暂勿使两者接触，立即将已接种好的平板覆盖于平皿盖

上，迅速用融化的石蜡密封平皿边缘周围。封毕，轻轻摇动平皿，使

被氢氧化钠溶液浸湿的脱脂棉与焦性没食子酸接触，然后置37℃恒温

箱中培养之。干燥器培养法是于干燥器底部放入氢氧化钠溶液适量，

然后再放入2-3个略高于液面的玻璃圆柱（如链霉素小瓶），将适量

焦性没食子酸用纸或纱布包好，放置于圆柱上面，使暂勿与氢氧化钠

接触，然后放下隔板，将已接种的培养皿或试管置于隔板上，待一切

准备好后，将盖盖好密封，并轻轻摇动干燥器，