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GFER抑制四氯化碳对HepG2细胞的损伤

高见;董凌月;安威

【摘要】目的探讨HepG2细胞内生长因子ERV1样基因(growthfactorErv1-

gene,GFER)表达降低后对四氯化碳(CCl4)诱导的细胞损伤的影响,以进一步明确

GFER对于肝细胞的保护作用.方法首先将GFERsiRNA转染入HepG2细胞,72h

后收集细胞并通过WesternBlot检测GFER的表达以明确沉默效率.再次将GFER

siRNA转染入HepG2细胞72h后,用CCl4处理细胞6h和24h,检测细胞内ATP

的含量,caspase-3的活性,并应用MTS方法测定细胞的增殖能力以及TUNEL方法

检测细胞凋亡.结果Westernblot结果显示转染GFERsiRNA后细胞内GFER的

表达降低.CCl4处理细胞6h后,GFER表达降低使细胞的增殖能力下降,细胞内ATP

含量增加,细胞凋亡更为明显.CCl4处理24h后,GFER表达降低使细胞的增殖能力

进一步下降,Caspase3活性进一步升高,凋亡细胞数目显著增多,而ATP的含量明

显下降.结论GFER表达降低促进CCl4对HepG2细胞的损伤.

【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》

【年(卷),期】2015(024)005

【总页数】5页(P447-451)

【关键词】生长因子样基因;四氯化碳;HepG2;caspase-3;凋亡

【作者】高见;董凌月;安威

【作者单位】首都医科大学细胞生物学系,肝脏保护与再生调节北京市重点实验室,

北京100069;首都医科大学细胞生物学系,肝脏保护与再生调节北京市重点实验室,

北京100069;首都医科大学细胞生物学系,肝脏保护与再生调节北京市重点实验室,

北京100069

【正文语种】中文

【中图分类】R735.7

肝脏是人体重要的器官，具有复杂的生物学功能。肝脏具有很强的再生功能，肝大

部分切除或受到各种毒物、药物损伤后均可以启动肝再生过程［1］。多种生长因

子、细胞因子参与肝再生进程，其中肝脏自身产生的肝刺激因子（hepatic

stimulatorsubstance，HSS）因具有很强的促肝细胞增殖作用，一直备受关注。

HSS最初是在1975年从初断乳的大鼠肝脏中提取的一种可以刺激肝部分切除后

再生的的活性物质［2，3］。随后对HSS基因及蛋白质结构的研究发现，HSS

与酵母ERV1（essentialforrespirationandviability）具有较高的同源性，属

于同一家族，因此又将HSS基因称为生长因子ERV1样基因（GrowthFactor

Erv1-Likegene，Gfer）［4］。Gfer主要定位于线粒体膜间隙中，具有巯基氧化

酶和细胞色素c还原酶的活性，参与线粒体的氧化磷酸化过程［5-7］。同时，

Gfer还可以稳定线粒体膜电位，抑制线粒体途径的细胞凋亡，是肝细胞内至关重

要的存活因子之一［8］。除此之外，还有研究表明Gfer可以减轻CCl4或氨基半

乳糖对肝细胞的毒性损伤，具有很强的肝细胞保护作用［9-10］。

有关Gfer在CCl4对肝细胞损伤中的保护作用研究，多采用Gfer过表达，而关于

Gfer沉默在CCl4对肝细胞损伤中作用则鲜少报道。RNAi是一种由双链RNA引

起的序列特异性基因沉默。它通过产生小干扰RNA（smallinterferingRNA，

siRNA），通过一系列反应，使与siRNA有同源序列的mRNA降解，从而达到抑

制目的基因表达的目的。因此本实验通过转染GfersiRNA的方法使HepG2细胞

中Gfer的表达下调，随后用CCl4处理细胞，探究Gfer表达下调后在CCl4对肝

细胞损伤中的作用，从而进一步证实Gfer对肝脏具有重要的保护功能。

1.材料

1.1细胞

HepG2细胞系（首都医科大学基础医学院细胞生物学实验室保存）。

1.2siRNA

GfersiRNA和