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β-葡萄糖苷酶抗体的制备及比较分析

余厚美;张振文

【摘要】β-葡萄糖苷酶是一种广泛存在于自然界的水解酶,其含量高低直接关系到

水解产物的量.木薯含有大量的生氰糖苷,是β-葡萄糖苷酶的底物之一,被水解后将

产生有毒的氰化物,给食品安全带来隐患.为保障食品安全,给木薯及其制品的氰化物

含量提供快速检测技术.本研究以A,B,C3种来源的β-葡萄糖苷酶为抗原免疫

Balb/C小鼠,并制备单克隆抗体和做出初步评价.结果表明,A抗原免疫的小鼠融合

后获得5株杂交瘤细胞株,效价均达到105以上,抗体亚型均为IgG1型,但单克隆抗

体与B抗原、C抗原、KLH、BSA均无交叉反应.说明不同来源的β-葡萄糖苷酶免

疫小鼠得到的抗体均为特异性抗体.

【期刊名称】《热带生物学报》

【年(卷),期】2019(010)001

【总页数】5页(P89-93)

【关键词】β-葡萄糖苷酶;抗体;抗体制备

【作者】余厚美;张振文

【作者单位】中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/国家薯类加工技术研

发分中心/农业部木薯种质资源保护与利用重点实验室,海南儋州571737;中国热带

农业科学院热带作物品种资源研究所/国家薯类加工技术研发分中心/农业部木薯种

质资源保护与利用重点实验室,海南儋州571737

【正文语种】中文

【中图分类】Q-331

β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase，EC3.2.1.21)是一种水解酶，也叫β-D-葡萄糖苷水

解酶、龙胆二糖酶[1]，能够水解结合于末端非还原性的β-D-葡萄糖苷键，同时释

放出β-D-葡萄糖和相应的配基[2]，相对分子质量一般在40×103～250×103之

间。1837年，LIEBIG和WOHLER首次在苦杏仁中发现β-葡萄糖苷酶，其广泛

存在于许多古细菌、细菌、真菌、酵母、曲霉、昆虫、动物和植物中[3-5]。不同

来源的β-葡萄糖苷酶的相对分子质量差异较大，这是由其结构和组成的不同导致

的。由于参与生物体的糖代谢，β-葡萄糖苷酶对维持生物体的正常生理功能有着

重要作用[2]，已经在哺乳动物的疾病防治和人类的癌症治疗方面广泛开展了应用

研究[2,6]；此外，β-葡萄糖苷酶还能将果、蔬、茶中的风味前体物质水解为具有

浓郁天然风味的香气物质，协助纤维素酶降解纤维素等功能[1-2,7-8]，在饲料工

业、生物合成和生物燃料等领域，β-葡萄糖苷酶同样有巨大的应用价值[4,9]。目

前，β-葡萄糖苷酶的检测技术主要是酶活法，主要测试方法有分光光度法、荧光

法、电化法和比色法[8]和以京尼平苷为底物检测酶活的一种新方法[10]。分光光

度法容易受到干扰，灵敏度低；荧光法灵敏度高，但是操作复杂，重复性差[11]。

比色法虽然灵敏度不如以京尼平苷为底物的方法高，但是总体来说，简单、快速、

重复性好[8，11]。酶联免疫法(ELISA)是免疫学领域应用最广泛的技术之一，是将

免疫学技术与现代测试手段相结合而建立的一种超微量的检测技术。ELISA的优点

是检测成本低、可大批量检测、专一性强、灵敏度高、安全性好，可进行定性或者

定量检测，不需要昂贵的仪器，操作简单，容易推广普及，尤其适合样本量大、检

测种类多的现场和基层检测[12-14]。免疫学分析技术主要利用抗原抗体的特异性

结合，已广泛应用于生命科学的各个研究领域。近年来免疫学分析技术以其抗原抗

体反应的高度专一性和特异性，在人类临床诊断、食品安全等领域广泛应用[15]。

1材料与方法

1.1实验材料以β-葡萄糖苷酶为抗原，该抗原分别购自北京索莱宝公司、上海源

叶生物公司、上海麦克林公司(表1)；DMEM不完全培养基购自北京索莱宝公司；

HAT、HT、DMSO、小鼠抗体亚型鉴定试剂盒、钥孔血蓝蛋白(keyholelimpet

hemocyanin,KLH)、牛血清白蛋白(BovineSerumAlbumin,BSA)为Sigma公司

产品；QuickAntibody-mouse5w佐剂、cloneeasy培养基购自北京博奥龙免疫

技术有限公司；弗氏佐剂、HRP-羊抗鼠、PEG融合剂、TMB底物液、封闭液和

抗体稀释液购自海南亿康生物科技有限公司；胎牛血清、小牛血清购自兰州民海生

物公司；Tween-20、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、氯

化钾和甘油等化学试剂购自国药集团化学试剂