第五章-免疫学检测及应用.ppt

第五章

免疫学检测及应用第一节沉淀反应第二节凝集反应第三节补体参与的抗原 抗体反应第四节中和反应第一节沉淀反应一、沉淀反应的原理二、沉淀反应的种类和特性一、沉淀反应的原理免疫沉淀反应（precipitation）：是指可溶性抗原分子与特异性抗体分子在溶液或凝胶中相混合形成复合物，当两者的比例合适时，可相互作用产生较大的不溶性免疫复合物析出，出现肉眼可见的不溶性沉淀物。沉淀反应曲线 沉淀反应中：抗体也称沉淀素（precipitin）抗原为沉淀原（precipitinogen）二、沉淀反应的种类和特性 根据抗原与抗体反应的环境条件及附加因素，沉淀反应可分为两种主要形式：1．溶液中沉淀反应2．凝胶中沉淀反应1．溶液中沉淀反应

（Precipitationreactioninsolution）是指在清彻透明的液体中，呈溶解状态的抗原与抗体在试管内或凹玻片上混匀，可凝聚成为肉眼可见的絮状或颗粒状的不溶性沉淀物。溶液中沉淀反应 盐溶液抗原+抗体———?沉淀 20~56℃、pH6～8抗原：沉淀原抗体：沉淀素1．溶液中沉淀反应

（Precipitationreactioninsolution）（1）环状沉淀试验（2）免疫比浊法（3）免疫沉淀技术（1）环状沉淀试验 环状沉淀试验（ringprecipitationtest）或毛细管内沉淀反应 （precipitationin capillarytube）（2）免疫比浊法(immunonephelomytry） 可溶性的抗原、抗体在液相中特异结合，形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液出现浑浊。复合物的量与浊度成正比。与标准品比较即可计算出样品中的抗原或抗体含量。免疫沉淀技术细胞膜成分的分析膜分子的研究2．凝胶中沉淀反应（Precipitationreactioningel）1968年Ouchterlong发明的。即将抗原抗体溶液放在琼脂凝胶板上的小孔中，使它们彼此对向扩散，在抗原抗体相遇的地方形成沉淀线。2．凝胶中沉淀反应此沉淀线的突出性质是：特异性抗原抗体不能通过；与沉淀线无关的抗原和抗体分子则可自由通过此沉淀线。2．凝胶中沉淀反应（1）单相免疫扩散试验（2）双相免疫扩散试验（3）免疫电泳（4）火箭电泳试验（5）免疫印迹技术单相免疫扩散试验双相免疫扩散试验双相免疫扩散试验（3）免疫电泳（immunoelectrophoresis）免疫电泳（4）火箭电泳试验（5）免疫印渍技术（immunoblotting）又称Westernblotting电泳印渍及检测免疫印渍HIV的免疫印渍第二节凝集反应一、凝集反应的原理二、凝集反应的种类和特性一、凝集反应的原理凝集反应（agglutination）：是指颗粒型抗原（如细菌或吸附在乳胶、离子交换树脂等不溶性的颗粒上的抗原），以及细胞型抗原（如红细胞或吸附在红细胞上的抗原）与相应抗体结合，在有适当电解质存在下，经过一定时间，可形成肉眼可见的凝集团块。凝集反应的特性 凝集反应的原理和影响因素与沉淀反应相同，但凝集反应有如下特性：1．凝集反应中的抗原为较大的颗粒抗原，离心沉淀可使颗粒下沉，而在沉淀反应中，抗原却是最细微的胶状溶液，溶液大多清晰透明。２．凝集反应中凝集块主要由抗原悬液形成，而在沉淀反应中，沉淀物主要由抗体形成。３．凝集反应因为抗原分子大，为使抗原与抗体在等当点发生反应，需稀释免疫血清中的抗体，使抗体分子不致于过多，而沉淀反应因抗原分子小，具有较大的反应面积，为了不使抗原过多则需稀释抗原。二、凝集反应的种类和特性1．直接凝集反应

（directagglutination） 是将细菌或红细胞与其相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。1．直接凝集反应（1）微生物凝集反应 如诊断伤寒病的肥达氏（Widalreaction）反应（2）同种红细胞凝集反应如检查血型的血细胞凝集现象红细胞凝集反应红细胞凝集反应的结果2．间接凝集反应

（indirectagglutination） 用可溶性抗原（或抗体）包被在一种与免疫无关的、具一