临床微微生物标本的采集注意事项接种及涂片染色.pptVIP

5.静脉导管尖端标本静脉导管尖端:培养静脉导管尖端是为了明确细菌来源。最常用的方法是半定量的方法，方法是用5cm长的导管末端部分在血液琼脂平板上滚动4次。培养物出现15个以上的菌落，提示有潜在的导管相关性感染。第三十页,共67页导管尖端阳性培养结果第三十一页,共67页6.脑脊液标本⑴培养基：5%羊血琼脂、5%兔血巧克力琼脂、葡萄糖肉汤⑵培养环境：置5%CO2.35℃环境培养。第三十二页,共67页7、胆汁或胸水或腹水标本⑴培养基:如标本量大时可按血液培养方法直接取16-20ml分别种入需氧和厌氧培养瓶。如标本量有限，可接种5%羊血琼脂、中国兰、葡萄糖肉汤。。⑵培养环境:35℃空气环境培养。第三十三页,共67页8、脓液标本⑴培养基:5%羊血琼脂、中国兰。⑵培养环境:35℃，空气环境培养。第三十四页,共67页9、生殖道标本普通细菌培养标本接种：⑴培养基：5%羊血琼脂。⑵培养环境：35℃，空气环境培养。淋球菌标本的接种：⑴培养基：接种于专用MTM平皿上。⑵培养环境：置5%CO2.35℃环境培养。第三十五页,共67页四、细菌涂片操作规范第三十六页,共67页涂片干燥固定染色水洗、吸干镜检1.染色一般程序制备涂片标本→染色第三十七页,共67页2.固定的目的和方法使细菌的细胞凝固,使菌体与玻片粘得更牢固可改变菌体对染料的通透性加热固定可杀死细菌,比较安全固定的方法将制成的标本匀速通过火焰三次第三十八页,共67页3.染色应具备最基本的染色技术，即革兰氏染色、抗酸染色和墨汁染色。⑴革兰染色:革兰染色报告必须包括染色反应或微生物种类和类别，描述物种的形态或结构。如革兰染色见到革兰阳性球菌，呈葡萄状排列；又如革兰染色见到真菌小分生孢子及菌丝。第三十九页,共67页革兰染色原理细菌的等电点较低,约在pH2～5之间,故在中性、碱性或弱碱性溶液中,菌体蛋白质电离后带负电荷,易与带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合,使细菌被染成紫色或红色。第四十页,共67页①龙胆紫液染10s（染料着染）→水洗

②碘溶液染10s（媒染剂媒染）→水洗

③丙酮酒精脱色10~20s（脱色剂）→水洗

④稀释的石炭酸复红10s（复染）→水洗

→干燥→镜检。

革兰氏染色步骤第四十一页,共67页革兰氏染色注意事项①革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。②菌龄也有影响。若菌龄太老,由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。③不要涂片太厚,会造成假阴性或假阳性。第四十二页,共67页红色革兰阴性菌、紫色革兰阳性菌第四十三页,共67页链状的革兰阳性球菌:提示链球菌短链，6个细胞，提示肠球菌或B群链球菌；肺炎链球菌血培养中长链的革兰阳性球菌（6个细胞）提示化脓链球菌或草绿色链球菌革兰氏阳性球菌第四十四页,共67页呈堆或四联排列的革兰阳性球菌提示葡萄球菌革兰氏阳性球菌第四十五页,共67页革兰氏阴性球菌第四十六页,共67页外型奇特的酵母菌,不要遗忘革兰阴性杆菌。第四十七页,共67页痰镜检的判断标准:痰培养标本实验室在接种前必须作痰涂片革兰染色,当在低倍镜下白细胞≤10个／L、上皮细胞≥25个／L时应作为不宜做培养的标本；当白细胞≤10个／L,上皮细胞≤25个／L时再参照油镜观察标本中细菌分布作出判断。第四十八页,共67页痰镜检的判断标准:当标本中细菌种类超过3种以上,未见到钎毛拄状上皮细胞,作为不合格标本；如见到数量不等的白血胞或钎毛拄状上皮细胞或两者同在,含1-2种不同细菌,可考虑继续培养,结果可根据病情再作分析；当涂片中见到1-3种细菌,少量的扁平上皮细胞,少量或较多钎毛拄状上皮细胞均可按合格标本继续培养。第四十九页,共67页*第一页，共67页一、标本采集和运送标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的环节但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成，所以也是最不容易做好的事情，而且不知道问题