耐药结核病诊断新技术.ppt

（一）DNA提取～40min高质量的样本DNA第32页,共39页，星期六，2024年，5月（二）加入PCR反应管第33页,共39页，星期六，2024年，5月（三）PCR过程和自动判读第34页,共39页，星期六，2024年，5月痰标本纯化DNAqPCR检测结果靶序列扩增曲线：内参扩增曲线：不同标本的内参扩增结果一致，显示纯化后的DNA溶液对扩增无抑制。高纯度模板DNA是分子检测可靠性的关键！第35页,共39页，星期六，2024年，5月临床试验结果此外，在北京胸科医院、广州胸科医院、沈阳胸科医院、乌鲁木齐胸科医院、山东省胸科医院、河南省CDC、厦门市CDC等单位进行临床应用或验证，均获得满意结果。第36页,共39页，星期六，2024年，5月探针熔解曲线技术耐多药检测的评估第37页,共39页，星期六，2024年，5月技术比较第38页,共39页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第39页,共39页，星期六，2024年，5月*世界卫生组织（WHO）自1997年起，每年都会发布一个全球结核病报告。报告的主要目的是为全世界提供全球、地区及国家关于结核病流行、预防、诊断和治疗方面的综合性必威体育精装版消息。2016年10月14日，WHO发布了2016年全球结核病报告，数据涵盖了202个国家和地区的99%的人口和结核病病例。2015年，世界范围内估计有1040万新发病例，新发病例中有120万（11%）HIV患者。2015年全球估计有48万新发的MDR-TB病例和10万耐利福平结核病（RR-TB）病例。印度、中国和俄罗斯三个国家占所有这58万病例的45%;2015年有140万人死于结核病，另外40万是TB/HIV双重感染人群死亡。虽然在2000到2015年间，结核病死亡以22%的速度在下降，但2015年结核病仍然排在全部死亡原因中的前十名。***即将出台的结核病防治“十三五”规划要求，到2020年，100%地市级定点医疗机构需具备开展药敏试验、菌种鉴定和分子生物学诊断能力，80%东中部、70%西部县区需具备开展分子生物学检测的能力。**多数研究报告提示：耐药的发生与结核杆菌的基因突变有关。总体上是基因一个或几个核苷酸突变（表现增加、缺失、替代），造成核苷酸编码错误致氨基酸错位排列，影响药物与靶位酶结合产生耐药。*****6h，MTC与21种NTM即可检测出来，涵盖目前国内常见的20多种NTM！直观，简洁！我们的MSI产品，能在6小时内鉴别22种分枝杆菌，几乎涵盖了国内分离的NTM致病菌。这就给临床提供了一款快速、可靠的分枝杆菌鉴定产品，为用药提供了可靠的科学依据。**在一定环境下，DNA双链在其长度和序列一定时，Tm值也一定，当发生错配时，Tm值下降，下降的幅度与发生错配的碱基数目、类型和位置，通过比较所检测样品与阳性对照（野生型标准菌株H37RV）之间熔解曲线的熔点(Tm值)的差异判断样品是否发生突变。当所有通道中样品的熔点与野生型熔点均一致(误差不超过1℃)时判定为野生型；若所有通道中任意一个(或者多个)通道中样品的熔点低于阳性对照2℃以上(ΔTm≥2℃)，判定为突变型，表明样本中结核分枝杆菌耐药。******关于耐药结核病诊断新技术全球范围内结核病疫情严重患病率高：新发患者1040万/年，其中有120万（11%）HIV患者；死亡率高：每年死亡人数达140万（13.46%），HIV/TB:死亡人数40万（33.33%）；耐药率高：48万新发的MDR-TB病例和10万耐利福平结核病（RR-TB）病例；接受MDR检测、报告和治疗的MDR-TB不足1/3，接受治疗的MDR-TB治愈成功率只有50%2016年全球结核病报告第2页,共39页，星期六，2024年，5月第3页,共39页，星期六，2024年，5月2015年全球估计MDR-TB患者数第4页,共39页，星期六，2024年，5月结核病快速及时诊断是结核病防控

重要因素第5页,共39页，星期六，2024年，5月灵敏准确操作简便检测时间短闭管检测检测位点全面对新型耐药检测技术的要求第6页,共39页，星期六，2024年，5月第7页,共39页，星期六，2024年，5月基因芯片技术第8页,共39页，星期六，2024年，5月结核病耐药与基因64-68%rpsL基因突变70%embB基因突变70%65%耐药基因93%95%95%rpoB基因突变利福平异烟肼50-70%kat