DB62T 4966-2024家畜光滑型布鲁氏菌抗体荧光偏振检测方法.docx

ICS13.100CCSC62

DB62

甘肃省地方标准

DB62/T4966—2024

家畜光滑型布鲁氏菌抗体荧光偏振检测方法

luorescencepolarizationassayforthedetectionofantibodiesagainstsmoothBrucellosisindomesticanimals

2024-09-20发布2024-12-20实施

甘肃省市场监督管理局发布

I

DB62/T4966—2024

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5生物安全要求 2

5.1人员防护 2

5.2试验工作区管理 2

5.3其他要求 2

6设备与材料 2

6.1仪器设备 2

6.2材料 2

7试剂 3

7.1阳性对照血清 3

7.2阴性对照血清 3

7.3标记OPS制备 3

7.4样品稀释液配制 3

8试验预处理 4

9试验操作 4

9.1荧光偏振仪程序设置 4

9.2加样检测 4

10结果判定 4

11样本保存与废弃物处理 5

II

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。

本文件由甘肃省动物卫生标准化技术委员会归口。

本文件起草单位：甘肃省动物疫病预防控制中心、中国动物疫病预防控制中心、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、中联瑞(北京)生物科技有限责任公司。

本文件主要起草人：曹丽萍、孙雨、郑红飞、蒋卉、王睿男、孙航、葛忠源、杨琪、朱小青、陈莉丽。

本文件由甘肃省动物疫病预防控制中心负责解释。

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家畜光滑型布鲁氏菌抗体荧光偏振检测方法

1范围

本文件规定了应用荧光偏振技术检测家畜光滑型布鲁氏菌抗体的方法。本文件适用于家畜光滑型布鲁氏菌抗体的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

光滑型布鲁氏菌抗体antibodiesagainstsmoothbrucellosis

动物感染光滑型布鲁氏菌后，针对其外膜脂多糖中的0-脂多糖产生的抗体。

3.2

荧光偏振试验原理principleoffluorescencepolarizationtest

荧光染料标记的小分子抗原被偏振光激发后产生偏振荧光，在溶液温度和粘度一定的条件下，荧光偏振强度主要取决于荧光标记物的体积，与荧光标记物转动速度成反比。当抗原分子未与抗体分子结合时，抗原分子体积较小，在溶液中旋转速度快，从而使光快速去极化，测得的荧光偏振值较低；当抗原分子与抗体分子结合时，抗原—抗体复合物体积较大，在溶液中旋转速度较慢，对光的去极化较少，测得的荧光偏振值较高。通过用荧光偏振仪检测荧光标记物激发的荧光偏振强度变化，而判断荧光标记物是否与其他物质特异性结合。

3.3

0-脂多糖o-polysaccharide

是由几个低聚糖单位重复构成的位于革兰氏阴性菌LPS最外侧的多糖链，即为菌体抗原(O抗原)。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

EDTA:乙二胺四乙酸溶液(EthylenediaminetetraaceticAcid)FPA:荧光偏振试验(FluorescencePolarisationAssay)

FITC:异硫氰酸荧光素(FluoresceinIsothiocyanate)

2

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LPS:脂多糖(Lipopolysaccharide)

mP:毫偏