维生素的测定方法.pptx

4.7维生素的测定;4.7.1概述;（1）维生素的分类及生理功能;;（2）测定的目的和意义;（3）维生素的测定方法

微生物法：基于某种微生物生长需要特定的维生素，方法特异性强、灵敏度高、不需要特殊仪器，样品不需经特殊处理，但只能测定水溶性维生素。

化学法：比色法、滴定法

仪器法：色谱法、荧光法、酶法、免疫法等。特别是HPLC可用于大多数维生素的测定，并且在某些条件下可同时分析几种维生素，但分析费用较高。

应根据不同的食品基质和条件选择不同的分析方法;重点讲解的方法：;4.7.2维生素A、E的测定—HPLC法

（GB/T 5009.82);VE的性质：又称生育酚，目前已经确认

的有8种异构体，最常见的有α、β、γ、δ-生育酚。溶于脂溶性溶剂，对热稳定，酸性环境中比碱

性环境中稳定，无氧条件下，对热、光及碱性环境中也相对稳定。VE广泛分布在各种粮食的胚和植物油中。;测定原理：

（1）液相色谱的原理：液相色谱是采用液体为流动相的一种色谱法。高效液相色谱仪由高压泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录和数据处理装置等部分组成。高压泵以恒定的流量，从贮液容器吸取作为流动相的溶剂输送到色谱柱，试样由进样装置导入，随流动相在色谱柱内进行分离。分离后的组分进入检测器检测，并用记录仪绘出色谱图，或与其他数据处理装置相连，由数据处理系统进行数据处理

色谱图：某一波长下各个不同时刻的吸光度值描点作图。;（2）高效液相色谱检测样品中的维生素A、E的原理：样品中的维生素E及维生素A经皂化提取处理后 将其

，

从不皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18反相柱将维生E和维生素A分离 经紫外检测器检测

， ，

并用内标法定量;(3）什么是内标法？;内标物的选取原则：能与被测成分完全分离，但其保留时间又尽可能接近被测成分的稳定的物质。;试剂

无水乙醚：不含有过氧化物。

无水乙醇：不得含有醛类物质。

无水硫酸钠。

甲醇：重蒸后使用。

重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。

抗坏血酸溶液（100g／L）：临用前进行配制。

氢氧化钾溶液（50g／100g）：取50g氢氧化钾,溶于50g水中，混匀;?;仪器和设备

高效液相色谱仪带紫外分光检测器。

旋转蒸发器。

高速离心机（带小塑料离心管）

高纯氮气。

紫外分光光度计。;样品处理：

皂化→提取→洗涤→浓缩→定容;（1）皂化：;（2）提取：

将皂化后的样品移入分液漏斗中，用50mL水分2-3次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用100mL无水乙醚分2次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中。轻轻振摇2min，静置分层，弃去水层。;(3)洗涤：;（4）浓缩：;（5）定容：;液相色谱推荐条件：

分析柱：C18反相柱5μm，4.6mm×25Cm；

流动相：甲醇：水=98：2，混匀，临用前脱气；

紫外检测器波长：300nm;

进样量：20μL；

流速：1.70mL/min。;标准曲线的制备

（1）维生素A和维生素E标准溶液的标定：

取上述配制的维生素A、E的标准溶液按一定的倍数进行稀释，在下表要求的条件下测定其吸光度，根据其吸光系数计算其准确浓度。;标准溶液浓度计算：;（2）标准曲线的制备:;;样品分析：

取样品处理液20μl，用标准溶液同样的条件进行色谱分析，绘制色谱图。

定性：根据保留时间定性

定量：根据色谱图求出某种维生素的峰面积与内标物峰面积的比值，以此比值在标准曲线上查得待测维生素的含量。;计算：;说明及讨论

维生素极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕色玻璃仪器。

乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中，不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。

本法是国家标准检验方法，适用于各种食物和饲料中维生素A和维生素E的同时测定。

本法不能将β-生育酚γ-生育酚分开，所以γ-生育酚的色谱峰中含有β-生育酚。;IU（国际单位）与质量的换算;4.7.3维生素A的测定（三氯化锑比色法）;步骤：

预处理：皂化、提取、洗涤、浓缩

制备标准曲线：用VA标准液绘制，用CHCl3调零。注意在移入光路前，迅速加入三氯化锑，6秒内测定

(3)样品测定：用样品溶液代替标准液溶液。;说明

萃取时,不要用力过猛，避免发生乳化。

氯仿中必须无水，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。

由于三氯化锑与VA所产生的兰色物质不稳定，注意在移入光路前，迅速加入三氯化锑，6秒内测定。

三氯化锑腐蚀性强，且遇水生成白色沉淀，实验用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。;植物油中VE的测定（文献方法）;4.7.4β-胡萝卜素的测定（HPLC法）;4.7.5 维生素B1的测定—荧光法(GB/T5009.84);维生素B