MSCs的分离培养鉴定及MSCs-si NRSF的构建和检测的开题报告.pdfVIP

MSCs的分离培养鉴定及MSCs-siNRSF的构建和

检测的开题报告

一、研究背景

干细胞是一种多向分化并具有自我更新能力的细胞，在体内起着维

持组织稳态和修复损伤组织的作用。目前已经发现的干细胞类型包括胚

胎干细胞和成体干细胞。其中，成体干细胞又可分为造血干细胞、神经

干细胞等多种类型，其中骨髓间充质干细胞（MSCs）作为成体干细胞的

一种，因具有分化为多种细胞类型的能力、来源广泛且获取方便等特点

而备受关注。

随着MSCs在医学中的应用越来越广泛，对其质量的要求也越来越

高。因此，MSCs的分离、培养和鉴定方法需要不断完善和优化。另外，

人们还探索了将MSCs通过基因修饰的方式应用于疾病治疗，如通过构建

MSCs-siNRSF（小分子siRNA靶向重复抑制子）来治疗神经退行性疾病

等。

二、研究目的

本研究旨在通过比较不同方法对MSCs的分离、培养和鉴定，优化

MSCs质量的评估方法，同时构建MSCs-siNRSF，检测其对MSCs生长和

分化的影响，为MSCs的应用提供参考依据。

三、研究内容

1.MSCs的分离和培养

采用常规的骨髓抽吸方法收集样本，通过密度梯度离心法分离MSCs，

并比较不同的培养条件对MSCs的生长和扩增效果，包括不同培养基、不

同血清浓度等。

2.MSCs的鉴定和评价

通过流式细胞术检测MSCs表面标志物，包括CD73、CD90、CD105、

CD14、CD34、CD45等，检测其纯度和表型特征。另外，采用CFU-F

（成纤维细胞集落形成）实验检测MSCs形成的集落形态和数量，并采用

多种分化方法，如骨形成分化、脂肪形成分化等来检测MSCs的分化能力。

3.构建MSCs-siNRSF并检测其效果

采用RNAi技术构建MSCs-siNRSF，经过转染后，检测其对MSCs

生长和分化的影响。比较MSCs-siNRSF组和对照组在酸碱平衡和细胞存

活率上的差异，并通过分化实验检测其分化能力的变化。

四、研究意义

本研究将深入探讨MSCs的分离、培养和鉴定方法，为MSCs的质量

评价提供一定的参考依据。此外，构建MSCs-siNRSF并检测其效果，为

MSCs基因治疗的研究提供实验依据，丰富了MSCs研究的内容和应用领

域。