土壤中分解尿素细菌的分离与计数 知识清单.docx

第2课土壤中分解尿素细菌的别离与计数学问清单

一、探讨思路

1．选择菌株

(1)试验室中微生物选择的原理

人为供应有利于________________生长的条件(包括养分、温度、pH等)，同时________或________其他微生物生长。

(2)选择培育基

在微生物学中，将允许__________种类的微生物生长，同时________或________其他种类微生物生长的培育基，称做选择培育基。

(3)别离分解尿素的细菌的选择培育基

①在该培育基配方中，为微生物的生长供应碳源的是____________，供应氮源的是________，琼脂的作用是凝固剂。

②该培育基对微生物具有选择作用。其选择机制是________________________________才能在该培育基上生长。

③土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成________，将尿素分解的反响式是________________________________________________________。

Taq细菌能忍受93℃左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热泉中觉察的，这说明，在找寻目的菌株时，要依据____________________________________________。

2．统计菌落数目的方法

(1)稀释涂布平板法(也叫活菌计数法)

①原理：当样品的稀释度足够高时，培育基外表生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的____________，通过统计平板上的________，就能推想出样品中大约含有多少活菌。______________是胜利地统计菌落数目的关键。

②操作

第一，设置__________组，增加试验的劝服力与精确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择________稀释度的菌液，分别取0.1mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板外表，放在相宜的温度下培育并计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平板上，培育并计算出__________。

第二，为了保证结果精确，一般选择菌落数在________的平板进展计数，假设设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新试验。

③计算公式：每克样品中的菌株数＝×M，其中C代表___________________________，V代表________________________________(mL)，M代表____________。

(2)设置重复与比照

①设置重复：培育过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂布________个平板，才能增加试验的劝服力与精确性。

②设置比照：试验中应设置比照，主要目的是解除________________________对试验结果的影响，进步试验结果的可信度。如__________比照组，视察培育物中是否有杂菌污染；设置________培育基，视察选择培育基是否具有________作用。

二、试验设计

试验步骤

1．土壤取样：从肥沃、潮湿的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土3cm左右，快速取土壤并装入____________密封或事先打算好的________中。

2．制备培育基：①制备________________培育基作为比照组，尿素为唯一氮源的培育基作为________，用来推断选择培育基是否具有____________。

②放宽稀释范围，如稀释倍数为103～107范围内的要分别涂布，而每个稀释度下须要______个选择培育基、________个牛肉膏蛋白胨培育基，因此须要15个选择培育基与5个牛肉膏蛋白胨培育基。

③两种培育基应各有一个作为________比照，此外还需打算8个灭菌的试管与1个灭菌的移液管。

3．样品的稀释与涂布平板：参考下面的试验流程示意图，将10g土样参与盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中(锥形瓶体积为250mL)，充分摇匀，汲取上清液1mL，转移至盛有________mL生理盐水的无菌大试管依次等比稀释至107稀释度，并依据由107～103稀释度的依次分别汲取______mL进展平板涂布操作。依据浓度从_____到______的依次涂布平板，不必更换移液管。

说明：图中的1、2、3平板是____________，4为____________________作比照，推断选择培育基是否具选择作用，还有两个空白比照，即不涂布稀释后菌液的选择培育基与牛肉膏蛋白胨培育基，验证培育基中是否____________。

4．将涂布好的培育皿放在30℃温度下培育，刚好视察与记录。

5．选择选择培育基上不同形态的菌落接入含____________培育基的斜面中，视察能否产生颜色反响。

6．细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在_____