临床免疫学检验：第11章固相膜免疫分析技术.pptxVIP

固相膜免疫分析技术固相膜免疫分析是一种基于免疫反应的快速诊断技术。它利用特异性抗原抗体反应来检测体液中的特定成分,具有灵敏度高、操作简单等优点。本章将详细介绍这一技术的原理、方法和应用。by

概述简单易用固相膜免疫分析技术采用免疫层析的原理,可以快速、简单地完成定性或定量的免疫学检测。高灵敏度借助固相膜上抗原或抗体的高结合效率,可以达到ppt级别的检测灵敏度。广泛应用该技术广泛应用于临床诊断、环境监测、食品安全等多个领域。

基本原理免疫反应固相膜免疫分析技术利用免疫反应的特异性和亲和力,在固相膜上进行抗原-抗体的结合。基质固定将待检测物质固定在膜材料上,然后与标记的试剂进行反应,形成可检测的信号。分子识别抗体或抗原与待测物质的特异性结合,实现目标分子的检测和定量分析。

制备固相膜1膜材料的选择选择合适的膜材料是制备固相膜的关键步骤。2膜的涂布采用涂布、浸渍等方法将膜材料涂布在支撑基材上。3膜的干燥通过干燥处理使膜材料牢固地附着在基材上。4膜的切割根据需要将制备好的膜片切割成适当大小的样品。制备固相膜是固相膜免疫分析技术的基础。这一过程涉及膜材料的选择、膜的涂布与干燥、以及最终切割成合适大小的膜片。每个步骤都需要仔细控制,确保膜的性能满足免疫分析的要求。

膜材料的选择孔径大小选用合适的孔径大小可以确保抗原或抗体能够有效结合。化学性质膜材料的化学性质应与所需分析的分子相适应。结合能力膜材料应具有良好的结合能力,确保抗原或抗体能可靠地固定。

固相膜的包被1表面修饰为了提高膜材料的亲和性和吸附能力,通常需要对膜表面进行化学修饰或物理涂层。2亲和物质包被在膜表面均匀涂布相应的亲和物质,如抗体、抗原或特定靶标分子,形成固相膜。3封闭处理为了减少非特异性吸附,可以采用封闭处理,如用蛋白质或其他化合物对膜进行被覆。

抗原或抗体的偶联选择合适的偶联方式根据抗原或抗体的性质和检测目的选择适合的偶联方式，如共价偶联、氨基偶联、硫基偶联等。优化偶联条件调整pH值、温度、反应时间等参数,确保偶联反应高效并保持抗原或抗体的活性。去除未反应物质通过层析柱或透析等方法去除反应后残余的小分子试剂,确保偶联产物纯度。验证偶联效果使用紫外分光光度计、电泳等方法检测偶联产物的纯度和活性,确保满足实验要求。

免疫反应的进行1固相化将抗原或抗体固定在固相膜表面2样本加入样本中的抗原或抗体与固相膜上的成分发生特异性反应3清洗去除未结合的物质4显色加入显色试剂显示反应结果固相膜免疫分析的免疫反应过程包括四个主要步骤：固相化、样本加入、清洗和显色。这些步骤确保了反应的特异性和灵敏度，最终实现定性或定量检测。

探测系统的选择1色谱仪探测利用色谱柱分离不同物质,再由光学探测器检测各组分浓度,实现定量分析。2光学探测器如吸收光谱仪、荧光光谱仪等,根据被检测物质的光学特性进行定量分析。3电化学探测器通过电流、电位或电荷量的变化来检测和定量被检测物质。4质谱仪探测借助质谱仪的高灵敏度和高选择性,能同时进行成分鉴定和定量分析。

定量分析的方法比色法通过测量分析物在特定波长下的吸光度或颜色强度来实现定量分析。是最常见的固相膜定量分析方法。化学发光法利用化学反应产生的光子发射来检测分析物浓度。灵敏度高、线性范围宽、无须仪器预热。电化学法依据分析物在膜表面发生的电化学反应来检测其浓度。无需复杂仪器,可实现现场快速测定。荧光法利用分析物本身或标记分子的荧光特性进行定量分析。灵敏度高,干扰小,可实现多指标同时测定。

定性分析的方法定性检测固相膜免疫分析可以快速判断样本是否含有特定靶标物质,提供阳性或阴性的定性结果。色带反应在膜上偶联特异抗原或抗体,与样本中的靶标发生免疫反应后,会出现特定颜色的色带。阳性对照在膜上设置阳性对照区域,用于比较样本反应强度,确定是否达到阳性水平。

影响因素温度温度过高或过低可能会影响膜材料的性能和免疫反应的速率。需要控制温度在适合的范围内。pH值pH值的变化会影响抗原和抗体的结合亲和力。需要保持适当的pH环境。反应时间反应时间过短可能导致不充分的结合,过长可能造成非特异性吸附。需要优化反应时间。浓度抗原、抗体及辅助试剂的浓度都会影响反应灵敏度和特异性。需要合理配置各种成分的浓度。

样本的采集与处理1样品采集根据检测项目的不同,采集适当类型的生物样本,如血液、唾液、尿液等。采集时要注意无污染、无损伤,保证样本的完整性。2样品准备进行必要的预处理如离心、溶解、稀释等,确保样品符合检测要求。同时做好样品的编号和信息登记,以保证数据的可追溯性。3样品保存根据样品的特性,选择合适的温度和容器保存样品,如低温冰箱、干燥剂等。保存时间要控制在可靠的范围内,避免样品变性。

质量控制标准样品使用具有已知浓度的标准样品进行定期校准,确保检测结果的准确性。阴性对照包括试剂空白等,用于监控整个