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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)实
验原理和操作步骤
实验原理:
SDS是对和蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、
快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来
进行分离的。
SDS是一种去拍剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折
王结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白
质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强
还原剂和去污剂后,电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决
于亚基分子量。
试剂和器材:
试剂:1.5x样品缓冲液〈10ml):0.6ml1molL的
Tris-HCI(pH6.8),.5ml509e甘油，2ml10%的SDS，0.5ml科基
乙醇，1ml1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4它保存数周，或在LEEEE
一20C保存数月。
2.凝胶贮液:在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺
0.8g,加重燕水溶解后,定容到100ml。过滤后置棕色瓶中，4尼
保存，一般可放置1个月。
3.pH8.9分离胶缓冲液:Tris36.3g，加1moLHCI48ml，
加重燕水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100m1，4保存。
4.pH6.7浓缩胶缓冲液，Tris5.98g，加1molLHCI48ml，
加重燕水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100m1，4尼保存。
5.TEMED(四乙基乙二腕)原液
6.10%过硫酸铵〈用重燕水新鲜配制)
7.pH8.3Tris-甘氨酸电极缓冲液:称取Tris6.0g,甘氨酸28.8g，
加蒸馏水约900ml,调pH8.3后,用蒸饮水定容至1000ml。置4C
保存，临用前稀释10倍。
8.考马斯亮蓝G250染色液，称100mg考马斯亮蓝G250，游
于200ml蒸饮水中，慢慢加入7.5ml70%的过氧酸，最后补足水
到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。
器材，电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。
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沪2
SS当名
Guiacteddatse116.230
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