2024年高中生物选修一知识点大全书本知识浙科版.docx

选修1《生物技术实践》知识点归纳

试验1???大肠杆菌的培养和分离

1.微生物是指构造简朴、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞构造的低等生物，包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌。细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核,只有一环状DMA分子(拟核)。以分裂(二分裂)的方式繁殖,分裂速度很快。用革兰氏染色法将细菌分為革兰氏阳性菌(革兰氏染液染色后,再脱色处理,细菌仍保留染色液的颜色)和革兰氏阴性菌两大类,区别在细胞壁的成分不一样。大肠杆菌是革兰氏阴性(细胞壁薄,有荚膜)、兼性厌氧的肠道杆菌。

2.细菌的分离措施有两种:划线分离法和涂布分离法。是消除污染杂菌的通用措施,也是用于筛选高体現量菌株的最简便措施之一。划线分离就是用接种环蘸菌液后在具有固体培养基的培养皿平板上划线,在划线的过程中菌液逐渐减少,细菌也逐渐减少,。划线最终,可使细菌间的距离加大。将接种后的固体培养基培养10~20小時后,一种细菌细胞就会繁殖成許多细菌细胞,形成菌落,不会重叠。在斜面上划线,则每个斜面的菌群就是有一种细菌产生的后裔。用于基因工程的大肠杆菌的工程菌,可以用划线分离法获得产物体現能力高的菌株。由于工程菌的质粒中一般有抗性基因(如抗氨苄青霉素基因),如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素,由于非工程菌的其他杂菌都没有抗性基因,因此在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。

涂布分离時,需要先将培养的菌液稀释,一般稀释10-5~10-7倍之间,然后取0.1mL不一样稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养,在合适的稀释度下,可产生互相分开的菌落，每个培养基里有20个以内的单菌落為最合适。

長处：划线分离法，措施简朴；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂。

?在培养微生物時,必须进行无菌操作。其首要条件是多种器皿必须是无菌的,多种培养基也必须是无菌的,转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无菌(防止杂菌污染)。进行恒温培养時,要将培养皿倒置,是由于培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发,倒放培养皿会使水蒸气凝結成水滴后,落入培养基的表面并且扩散,菌落中的细菌也会随水扩散,菌落互相影响,很难再提成单菌落,达不到分离的目的。

????4.细菌扩大培养要用LB液体培养基(通用培养基、常用于做生理学研究和发酵工业),划线分离要用LB固体培养基(常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保留)。我們在运用微生物時,常常规定所运用的微生物不被其他微生物污染。因此,在培养微生物時必须进行无菌操作

????无菌操作的首要条件是多种器皿必须是无菌的,如多种大小的培养皿、试管、三角瓶、取样器的头(或称“枪头”、“tip”)、移液管、三角刮刀、接种环、镊子等等。这些用品一般用高压蒸汽灭菌法前多种用品均需用牛皮紙或报紙包好。培养皿可几种包在一起;试管加棉花塞或塑料盖后也是几种包在一起;三角瓶可用封口膜(市售产品,既通气又不使菌进入)或6层纱布封口,再用牛皮紙或报紙封口;移液管上端用镊子放入少許棉花,再用牛皮紙包上(目前多不用移液管而用取样器);取样器的“枪头”放在可灭菌的专用塑料盒中,也可放在上口用牛皮紙包好的烧杯中……在121℃(1kg/cm2压力)下灭菌15min。值得注意的是,试验中所需的棉花不能用脱脂棉,因脱脂棉易吸水,吸水后轻易引起污染。灭菌后,一般将试验用品放入60~80℃的烘箱中烘干,以除去灭菌時的水分。在进行试验操作前,将需要使用的用品从烘箱中取出,放到超净台上(没有超净台時,可制作一种双手在内操作、又可在外观看、并有紫外灯灭菌的箱子),然后打开紫外灯和过滤风,灭菌30min。

??除了试验用品必须无菌外,多种培养基也必须是无菌的。培养基是微生物生存的环境和营养物质。“细菌喜荤,霉菌喜素”,一般细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制,还要加入一定量的氯化钠,以维持一定的渗透压;霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁既可。此外,细菌一般规定在中性偏碱的环境中生長,霉菌规定在中性偏酸的环境中生長,因此,在制备培养基時需调整培养基的酸碱度。加入培养基的三角瓶、试管也要在121℃下灭菌15min,假如培养基中有葡萄糖,為防止葡萄糖分解碳化,要用500g/cm2压力(90℃以上)灭菌30min。有些不能加热灭菌的化合物,如尿素(加热会分解等,只能用G6玻璃砂漏斗过滤,但玻璃砂漏斗使用前也要在121℃下用紙包好灭菌。玻璃砂漏斗有6种,既G1~G6,G6孔径最小,细菌不能滤过。玻璃砂漏斗用后需用1molL的HCL浸泡,并抽滤去酸再用蒸馏水洗至洗出液呈中性,干燥后保留。

????在将培养基加到三角瓶、试管和培养皿中時,三角瓶口、试