高考生物学二轮总复习精品课件 大题分析与表达练 6 基因工程类大题突破 (3).ppt

(3)交错延伸PCR与普通PCR技术的区别是每轮扩增仅延伸一小段,经过多轮“产物—模板”交替结合、延伸,最终扩增出交错重组基因片段混合产物。分析题图可知,由于采用交错延伸PCR的方法重组LA序列,故最终获得的混合PCR产物中,LA基因片段的位置不确定,即DNA分子的种类数无法计算。通过交错延伸PCR过程中,第一轮以LA1(LA2)为模板合成的子链片段在第二轮复制时作为引物结合到LA2(LA1)的模板上继续合成子链,经过多轮交错循环扩增,可以使产物同时含有两种基因的序列。1234(4)由于SalⅠ和Pvit2有两个识别位点,若选用则会破坏标记基因或复制原点,因此要选用XhoⅠ和BamHⅠ进行切割,为使目的基因定向插入PM质粒,交错延伸的PCR过程引物的5端需引入XhoⅠ的识别序列。PM质粒中带有asd-突变基因,为了筛选含有PM质粒或重组PM质粒的受体菌,需要选用asd基因正常表达的受体菌。PM质粒有完整的氯霉素抗性基因cat,重组PM质粒没有完整的氯霉素抗性基因cat,可以将正常培养基上分离出的受体菌单菌落平移印制到含氯霉素的培养基上,在含氯霉素的培养基上无法生长的菌落对应的原菌落即为含有重组PM质粒的受体菌。123412344.(2023·福建龙岩三模)重组PCR技术是一项新的PCR技术,通过重组PCR技术能将两个不同的DNA连接成为一个新DNA分子。某科研小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB和ST1两个基因片段,利用重组PCR技术构建了LTB—ST1融合基因,制备过程如图1所示。回答下列问题。图1(1)利用PCR技术扩增目的基因的过程中,向反应体系中加入的物质除了引物和模板链外,还需要加入________________________________________。利用PCR技术扩增目的基因,依据的生物学原理是。?(2)从P2、P3两种引物的角度分析,LTB和ST1基因能够融合的关键是PCR1和PCR2不能在同一个反应体系中进行,原因是??。(3)②过程(填“需要”或“不需要”)加入引物,原因是_________________________________________________________________________________________________________________。??耐高温的DNA聚合酶和四种脱氧核苷酸(或Taq酶和dNTP)DNA双链复制引物之间的结合会干扰引物和模板链的结合,从而影响PCR过程不需要两条母链的起始段位置的碱基序列即为引物,可以作为子链合成的引物,为DNA聚合酶提供3端1234(4)科研小组为了检测是否成功构建出融合基因,将反应后体系中的各种DNA分子进行电泳,结果如图2所示。则融合基因最可能是。图23号DNA分子1234解析(1)PCR体系中需要加入的物质有引物、模板链、耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)和dNTP等。PCR是一项体外扩增DNA的技术,利用PCR技术扩增目的基因,依据的生物学原理是DNA双链复制。(2)由于P2和P3两种引物存在互补配对序列,因此PCR1和PCR2不能在同一个体系中进行,理由是引物之间的结合会干扰引物和模板链的结合,从而影响PCR过程。(3)②过程不需要加入引物,两条母链的起始段位置的碱基序列即为引物,可以作为子链合成的引物,为DNA聚合酶提供3端。(4)PCR体系中存在融合和未融合的DNA分子,融合的DNA包括了2个DNA分子片段,其相对分子质量较大。根据电泳图可知,3号DNA分子的相对分子质量最大,因此3号DNA分子最可能是融合基因。1234本课结束6基因工程类大题突破12341.(2023·山东淄博三模)下图为抗除草剂基因和质粒的结构示意图,科研人员将抗除草剂基因导入玉米细胞,获得了抗除草剂玉米。请回答下列问题。1234(1)在质粒上,启动子的作用是,图中质粒未标出的必需元件是。?(2)用PCR技术扩增抗除草剂基因时,需在引物1上设计限制酶的酶切位点,即,抗除草剂基因的链为转录的模板链。?(3)在构建抗除草剂基因表达载体时,为将抗除草剂基因正向连接在质粒上需要双酶切,用于切割质粒的限制酶是,不选择MboⅠ的理由是