免疫金标记技术(研究生讲义)-.pptVIP

*金免疫测定技术—

固相膜免疫测定技术固相载体:硝酸纤维素膜标志物:胶体金斑点金免疫渗滤试验（dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA），又称为滴金免疫测定法金免疫层析试验（goldimmunochromatographicassay,GICA）*斑点金免疫渗滤试验

（dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)????????????????????????????????????????????????????????????????????操作示意图装置分解图盖微孔膜吸水垫料底加标本免疫金洗涤液*技术类型:夹心法、间接法

双抗体夹心法*

间接法

*质控双抗体夹心法:相应抗原间接法:反应斑点质控点人IgG*反应线质控线阳性阴性*操作技术要点AB*金免疫层析试验（goldimmunochromatographicassay,

GICA)GTC*夹心法竞争法(抑制法）间接法金免疫层析试验（goldimmunochromatographicassay,GICA)双抗原夹心法双抗体夹心法*双抗体夹心法G区:金标特异性抗体(兔型)C区:羊抗兔IgT区:特异性抗体吸水纸标本阳性结果*竞争法标本G区:金标特异性抗体(兔型)C区:羊抗兔IgT区:标准抗原吸水纸阳性结果*标本G区:金标特异性抗体(兔型)C区:羊抗兔IgT区:标准抗原吸水纸阴性结果*间接法－反流免疫层析法③⑤合上检测盒窗(B)吸水材料(A)金标抗人IgG(G0)吸水材料(D)吸水材料(F)标本加样区(E)包被抗原（T）①②标记线(G)④⑥⑥液体流动方向包被抗抗体（C）*标本CTCT闭合前闭合后E阳性结果**************免疫金标记技术

(Immunogoldlabellingtechique)*免疫技术试剂标本AgAbAbAg*标记免疫技术试剂标本Ag*AbAb*Ag放射性核素荧光素酶化学发光剂胶体金标记物技术放射性核素放射免疫技术荧光素荧光免疫技术酶酶免疫技术化学发光剂化学发光免疫技术胶体金金免疫技术*金免疫测定技术金免疫组织化学染色技术金免疫技术斑点金免疫渗滤试验金免疫层析试验金免疫光镜染色技术金免疫电镜染色技术*简介胶体金颗粒具有高电子密度的特性,故在金标蛋白的抗原抗体结合处,显微镜下可见黑褐色颗粒；当这些标记物在相应的标记处大量聚集时,可在载体膜上呈现肉眼可见红色或粉红色斑点(线);从而用于抗原或抗体物质的定位或定性。金免疫组织化学染色技术金免疫测定技术**制备胶体金制备免疫金建立金免疫测定技术*

胶体金的特性胶体金（金溶胶）:是由金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。胶体金的特性胶体性质:稳定性、对电解质的敏感性光吸收性和呈色性:胶体金的光吸收峰波长随颗粒的大小而变化。稳定性:影响因素---电解质、溶胶浓度、温度、稳定剂*呈色性不同大小的胶体金呈现不同的颜色小颗粒--橙黄色中等颗粒—酒红色较大颗粒—深红色大颗粒—紫色*胶体性质稳定性:稳定地、均匀地、呈单一分散状态悬浮于液体中*1％柠檬酸三钠加入量（ml）*胶体金特性λmax呈色?162.00橙色518nm24.51.50橙红522nm411.00红色525nm71.50.70紫色535nm胶体金粒径（nm）*胶体金的制备化学还原法:向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂使金离子变成金原子,形成金颗粒悬液。还原材料:氯金酸（HAuCl4)还原剂:枸橼酸盐、白磷、硼氢化钠、维生素C。。。。最常用的制备方法:枸橼酸盐还原法