《黄芩中7种黄酮类物质含量的测定》（文本）.pdf

黄芪中7种黄酮类物质含量的测定

高效液相色谱法

1范围

本文件规定了黄芪中黄酮类物质的液相色谱测定方法。

本文件适用于黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮苷、木樨草苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、

金丝桃苷、芒柄花苷和芒柄花黄素的液相色谱法测定。

本文件的方法检出限：毛蕊异黄酮葡萄糖苷、金丝桃苷、芒柄花黄素的方法检出限为

0.075mg/kg，槲皮苷、木樨草苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、芒柄花苷的方法检出限为

0.15mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期

的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所

有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要规定的术语和定义。

4原理

试样中的黄酮类物质经甲醇超声提取，旋蒸近干，甲醇定容，微孔滤膜过滤，液相色谱

仪检测和确证，外标法定量。

5试剂与材料

除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，水符合GB/T6682中规定的一级水。

5.1乙腈（CHCN）：色谱纯。

3

5.2甲醇（CHOH）：色谱纯。

3

5.3甲酸（CHO）：色谱纯。

22

5.4毛蕊异黄酮葡萄糖苷（Calycosin-7-glucoside，CAS号20633-67-4）、槲皮苷

（quercitrin，CAS号522-12-3）、木樨草苷（cynaroside，CAS号5373-11-5）、山奈酚-3-O-

芸香糖苷（kaempferol-3-O-rutinoside，CAS号17650-84-9）、金丝桃苷（Hyperoside，CAS

号482-36-0）、芒柄花苷（Ononin，CAS号486-62-4）和芒柄花黄素（formononetin，CAS

号485-72-3）的液相色谱法测定。

5.5标准溶液配制

5.5.1标准储备溶液：分别准确称取适量的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮苷、木樨草苷、山奈

酚-3-O-芸香糖苷、金丝桃苷、芒柄花苷和芒柄花黄素（精确至0.01mg），用甲醇溶解，

分别配制成1000mg/L的标准储备溶液，-18℃下保存，有效期1年。

5.5.2混合标准中间溶液：根据需要分别取黄酮类物质的标准储备液，用甲醇稀释成10mg/L

标准中间溶液，-18℃下保存，有效期3个月。

5.60.1%磷酸溶液（体积分数）：量取1mL磷酸，用水定容至1000mL。

5.7滤膜：0.22μm，有机相。

5.8离心管：50mL，塑料。

6仪器与设备

6.1液相色谱仪：配有紫外检测器。

6.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。

6.3高速万能粉碎机：10000r/min。

6.4超声波清洗机。

6.5离心机：4000r/min。

6.6涡旋混合器。

7分析步骤

7.1试样的制备

将试样在50℃烘箱中干燥24h，用高速万能粉碎机粉碎，过45目筛，置于密封袋中备

用。

7.2试样的提取

平行做两份试样。称取试样2g（精确至0.0001g）于50mL离心管，加入20mL甲醇，

充分振摇混匀，超声提取30min，放入离心机，4000r/min离心3min，上清液过0.22μm

滤膜，待测定。同试样进行空白试验，除不称取样品外，均按试样步骤进行。

7.3液相色谱参考条件

a）色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm（i.d），5μm，或性能相当者；

b）柱温：40℃；

c）流速：0.3mL/min；

d）流动相：A相为0.1%磷酸溶液（5.6），B相为乙腈，梯度洗脱条件见表1；

e）进样量：10.0μL。

f）检测波长：203nm。

表1流动相及其梯度条件（V+V）