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专题23基因工程

专题过关检测

非选择题

1.在聚合酶链式反应(PCR)中,除了作为复制对象的长链DNA之外,反应溶液中还添加有

作为引物的短单链DNA、dNTP(脱氧核苷三磷酸,N表示任意某一种碱基)和酶。实验时

需要使反应溶液的温度周期性地发生变化以完成“变性→复性→延伸”的循环。DNA复

性温度与互补碱基对之间的氢键数呈正相关。

(1)PCR过程中添加的酶为,作用是

。

(2)实验1:在图1的引物1到引物4中,只使用1种作为引物,复性的温度设定为

t℃,PCR后只合成出了与模板DNA2相同的单链。该实验使用的引物是。

实验2:将引物变更为图1中的引物3和引物4,其他条件与实验1相同的情况下进行

PCR,双链DNA完全没有被复制,请在图1中,将引物3和引物4与模板链结合的关系绘

制出来。

图1

(1)实验3:对图2中的双链DNA,使用引物5和引物6,将复性的温度设定为t℃,进行

了PCR。结果是双链DNA完全得不到复制。而当设定温度改变后,双链DNA得到了复

制。温度改变的大致思路是

。

图2

(4)实验4:PCR技术与电泳鉴定结合进行DNA测序。以待测序的DNA链为模板链,使用

3-TATA……ATGCGCA-5末端结合了高灵敏度检测化合物X的DNA单链序列作为引物,

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在第1次实验中,用dNTP进行反应。第2次实验,在第1次实验使用上述dNTP的基础

上,将反应混合物分为四个试管,分别加入四种双脱氧核苷三磷酸(ddNTP),即在2、3号

碳上都脱氧(ddATP、ddCTP、ddTTP、ddGTP,结构见图3),每个试管只加一种。第1次与

第2次实验四只试管,在经过相同的温度变化循环后,对反应溶液进行了适当处理,使全

部的DNA以单链DNA的形式存在。使用能区分开一个碱基长度差异的凝胶电泳法对含

有化合物X的单链DNA进行分析,获得了如图4所示的结果。

①ddNTP一旦参与聚合反应,则DNA单链延伸立即终止,原因是

。

②请根据图4写出模板链碱基序列:。

图3图4

答案(1)耐高温的DNA聚合酶(或TaqDNA聚合酶)将游离的脱氧核苷酸连接到引物

的3端(2)引物2

(3)适当降低复性温度(4)①ddNTP的2、3号碳上都脱氧,参与聚合反应后无法与游离

脱氧核苷酸形成磷酸二酯键②5-TAGCGTAGTA-3

2.IKK激酶由IKKα、IKKβ和IKKγ三种亚基组成,该酶参与动物体内免疫细胞的分

化。临床上发现某重症联合免疫缺陷(SCID)患