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牛血清白蛋白制备工艺流程
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牛血清白蛋白制备工艺流程。
1.血液收集。
从健康牛的颈静脉中收集全血,并加入抗凝剂(如柠檬酸钠)以防止凝血。
2.血清离心。
将全血离心以分离血清和血细胞。血清含有牛血清白蛋白(BSA)。
3.初步纯化。
通过乙醇沉淀法去除血清中的脂类、免疫球蛋白和其他杂质。
4.酶解。
使用蛋白水解酶(如胃蛋白酶或胰蛋白酶)处理血清,将大分子BSA降解
为较小的片段。
5.离子交换色谱。
使用阴离子或阳离子交换层析柱分离酶解产物。BSA会与层析柱相互作用
并被洗脱。
6.凝胶过滤层析。
使用凝胶过滤层析柱进一步纯化BSA。BSA分子会根据大小通过层析柱,
而杂质会被洗脱。
7.离子交换再纯化。
使用与步骤5不同的离子交换层析柱进行第二次离子交换纯化,以去除残
留杂质和BSA异构体。
8.浓缩和灭菌。
使用超滤或透析浓缩纯化的BSA溶液。然后,通过热灭菌或过滤灭菌BSA。
9.干燥。
将灭菌后的BSA溶液冷冻干燥成粉末。
注意事项:
确保使用健康牛的血液。
在整个过程中保持無菌条件。
严格遵循酶解、色谱和干燥步骤中的时间和温度参数。
仔细验证BSA的纯度和活性。
将制备好的BSA储存在干燥、阴凉的地方以保持稳定性。
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