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单克隆抗体的制备
1975年，Köhler和Milstein创立了杂交瘤技术制备单克隆抗体，单克隆抗体具有特异
性高，灵敏度高，重复性好，可供应量大，检测时间短以及能够查出混合物中的少量成分等
优点。
1试验材料
1.1试验动物和细胞
雌性6～8周龄BALB/c小鼠
SP2/0骨髓瘤细胞
1.2主要实验试剂
HRP标记羊抗小鼠IgG、福氏完全佐剂（FCA）、福氏不完全佐剂（FIA）、聚乙二醇（PEG）、
二甲基亚砜（DMSO）、降植烷、TMB底物、HAT(50×)、HT(50×)、三抗溶液（100×）小鼠
单抗Ig类和亚类鉴定用ELISA试剂盒均为SIGMA公司；
DMEM粉、特级胎牛血清（FBS）均为GIBCO公司；
牛血清白蛋白（BSA）
1.3主要实验仪器和耗材
CO2细胞培养箱（Thermo和上海新苗医疗器械制造有限公司WJ-160B-Ⅲ）
酶联检测仪（BIO-RADModel680）
血球计数板（上海求精生化试剂仪器有限公司）
pH计（Sartorius赛多利斯科学仪器）
APL高压灭菌锅（CL-32L）
生物安全柜(ESCO北京五州东方科技发展有限公司)
三恒电泳仪（JY600C）
数显恒温磁力搅拌器（78HW-1，杭州仪表电机有限公司）
电子分析天平（Sartorius赛多利斯科学仪器）
分光光度计（WPABiowaveⅡ+）
进口液氮罐（Thermo）
ProteinA柱
恒温水浴锅（HH-2金坛市科兴仪器厂）
微型台式真空泵（GL-80ZB型，海门市）
电热恒温培养箱（DHP-9032上海天恒医疗器械）
低速离心机(L-550长沙湘仪离心机仪器有限公司)
高速冷冻离心机（SIGMA2-16PK）
倒置显微镜（NikonTS100）
超低温冰箱(Thermo)
96孔酶标板（）
96孔、24孔细胞培养板、T25培养瓶、35mm培养皿、60mm培养皿、100mm培养皿、冻存管
0.22μm过滤器(PALL)
2主要试剂配制
2.1常规试剂配制
PBS（或PB）（0.02mol/L，pH7.4）：
A液（0.2mol/LNaHPO）：NaHPO·12HO71.64g,加蒸馏水至1000ml；
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B液（0.2mol/LNaHPO）：NaHPO·2HO3.12g,加蒸馏水至1000ml；
24242
取A液81ml加B液19ml混合，再用生理盐水（或蒸馏水）做10倍稀释即成。
饱和硫酸铵溶液（pH7.4）：称取80~85gA·R级(NH)SO，以50~80℃蒸馏水100ml溶解，
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搅拌20min，趁热过滤。冷却后以浓氨水（15NNHOH）调pH至7.4。配好的饱和硫酸铵，
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瓶底应有结晶析出。取饱和硫酸铵40ml，加蒸馏水60ml稀释即成40%饱和硫酸铵。
2.2细胞融合试剂配制
DMEM不完全培养基：DMEM粉1袋，3.7gNaHCO3，用1mol/LHCl调pH至7.2-7.3，加
灭菌超纯水定容至1000ml。0.22μm滤膜过滤除菌至1L试剂瓶中，4℃保存。
胎牛血清（FBS）的灭活：56℃，灭活30min，分装100ml或50ml一瓶，-20℃冻存。
10%FBS完全培养基：FBS10ml，DMEM不完全培养基90ml，三抗溶液1ml，4℃保存。
20%FBS完全培养基：FBS20ml，DMEM不完全培养基80ml，三抗溶液1ml，4℃保存。
HAT培养基：20%FBS培养基98ml，HAT（50×）贮存液2ml。
HT培养基：20%FBS培养基98ml，HT（50×）贮存液2ml。
冻存液：完全培养基:DMSO=9.2:0.8，即含8%DMSO，与培养过程中使用的血清保持一
致，需新鲜配制。
2.3ELI
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