胚胎工程实验技术.ppt

3.胚胎的分割方法酶解法：用链霉蛋白酶处理机械法：用分割针切开透明带第32页,共52页，星期六，2024年，5月胚胎分割的基本操作选择良好的桑椹胚或囊胚移入培养皿中，用分割针或分割刀片将其切开，吸出其中的半个胚胎注入透明带中或直接移植给受体。第33页,共52页，星期六，2024年，5月第34页,共52页，星期六，2024年，5月4.分割胚的培养；

原因：早期胚胎切割后发育能力低，一般是经包埋后移植到中间受体的输卵管中培养几天至囊胚，再从输卵管中回收胚胎，最后移植给受体。方法：体外培养体内培养（需琼脂包埋）第35页,共52页，星期六，2024年，5月琼脂包埋的作用固定胚胎便于回收第36页,共52页，星期六，2024年，5月分割胚的移植要求：胚胎分割后可以直接移植给受体，也可以进行超低温冷冻保存。为提高冷冻胚胎移植后的受胎率，分割的胚胎需要在体内或体外培养到桑椹或囊胚阶段，再进行冷冻。第37页,共52页，星期六，2024年，5月受精卵分裂早期胚胎胚胎分割基本过程代孕母牛植入植入分割第38页,共52页，星期六，2024年，5月胚胎分割的基本过程胚胎移入培养液分割胚胎（机械法、酶处理）移植胚胎给受体着床产仔第39页,共52页，星期六，2024年，5月三）胚胎分割技术的应用应用：在畜牧方面：扩大优良家畜的数量在研究方面：培养遗传特性相同的实验动物性别鉴定存在问题：如：早期胚胎细胞的分化和定位的发育机制不同阶段胚胎细胞的分化时间和发育潜力第40页,共52页，星期六，2024年，5月第41页,共52页，星期六，2024年，5月四、胚胎干细胞核移植技术1.概念：（胚胎干细胞）：简称ES或EK细胞，是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞。第42页,共52页，星期六，2024年，5月2.特点:1)形态：体积小、细胞核大、核仁明显。2)功能：具有发育的全能性；是一种高度未分化的细胞，可分化为成年动物体内任何一种组织和器官。3）应用：在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化；对它可以进行冷冻保存，也可以进行遗传改造。3.主要用途：(1)治疗人类的某些顽症(2)培育出人造组织器官，用于器官移植(3)是研究体外细胞分化的理想材料第43页,共52页，星期六，2024年，5月1.饲养层细胞培养体系的建立饲养层培养体系的构成胚胎成纤维细胞作用：抑制细胞分化成纤维细胞（fibroblast）：是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymalcell)分化而来。细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，细胞核卵圆形，核仁大而明显。细胞功能活动旺盛，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。饲养层细胞（feederlayer）：在正常机体内，细胞除了获得一些血液来的营养外，还在细胞与细胞之间互换特殊的物质，用于分裂分化和营养等。因而，在细胞体外培养中，除了正常的培养基外，先培养一层特殊的细胞，然后再在其上接种要实验的细胞，这样更能模拟体内环境。这些特殊的细胞就是饲养层细胞，通常是成纤维类细胞，这些细胞可以提供实验细胞更好的营养，有的分化研究则是必须有饲养层细胞。第44页,共52页，星期六，2024年，5月2.胚胎干细胞的获得时期：囊胚或囊胚期以前如小鼠：桑椹胚、囊胚人体：囊胚、原始生殖细胞培养：置于含饲养层的培养液中培养方法：原代培养和传代培养传代培养的作用：抑制胚胎干细胞分化第45页,共52页，星期六，2024年，5月一）胚胎干细胞核移植程序饲养层细胞培养体系的建立胚胎干细胞的获得胚胎干细胞的核移植第46页,共52页，星期六，2024年，5月胚胎干细胞培养第47页,共52页，星期六，2024年，5月3.胚胎干细胞的核移植指把胚胎干细胞核移植到去核的卵细胞中，经过胚激活、胚胎培养、胚胎移植后直接由受体完成克隆动物的技术。第48页,共52页，星期六，2024年，5月胚胎干细胞核移植：第49页,共52页，星期六，2024年，5月二）胚胎干细胞的应用培养克隆动物的核供体获得基因敲除动物治疗性克隆第50页,共52页，星期六，2024年，5月1.下列有关动物胚胎移植的叙述中，错