蛋白质的结构.ppt

1多肽;肽键将氨基酸与氨基酸头尾相连;肽链中的肽平面;;肽键;;在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序排列，这种排列顺序称为多肽的氨基酸顺序。

通常在多肽链的一端含有一个游离的?-氨基，称为氨基端或N-端；在另一端含有一个游离的?-羧基，称为羧基端或C-端。

氨基酸的顺序是从N-端的氨基酸残基开始，以C-端氨基酸残基为终点的排列顺序。如上述五肽可表示为：Ser-Val-Tyr-Asp-Gln

多肽的命名取从N-端的氨基酸残基开始，称：某氨酰某氨酰┅┅某氨基酸。;四肽的结构;多肽的性质;多肽的性质;（3）.旋光性

蛋白质水解所得的各种肽，酶解时不发生消旋，就具有旋光性。

一般短肽的旋光度约等于组成该肽的各个氨基酸旋光度之和.

大肽和蛋白质的旋光度一般大于组成该肽的各个氨基酸旋光度之和.;(4)颜色反应;

多肽的双缩脲反应是多肽特有的颜色反应;双缩脲是两分子的尿素经加热失去一分子NH3而得到的产物。

双缩脲能够与碱性硫酸铜作用，产生兰色的铜-双缩脲络合物，称为双缩脲反应。含有两个以上肽键的多肽，具有与双缩脲相似的结构特点，也能发生双缩脲反应，生成紫红色或蓝紫色络合物。这是多肽定量测定的重要反应。;天然存在的重要多肽;;+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO-+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO-

Met-脑啡肽Leu-脑啡肽;?

L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Val

??

L-OrnL-Orn

??

L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu?

短杆菌肽S(环十肽)

?由细菌分泌的多肽，有时也都含有D-氨基酸和一些不常见氨基酸，如鸟氨酸（Ornithine,缩写为Orn）。;习题：;2蛋白质的一级结构;蛋白质一级结构的测定;1样品必需纯（97%以上）；

2知道蛋白质的分子量；

3知道蛋白质由几个亚基组成；

4测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数。

5测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。;蛋白质和多肽氨基酸顺序的测定;酸水解;碱水解;酶水解;测定步骤;测定步骤;测定步骤;测定步骤;二硫键的切割与保护;测定步骤;

;(4)测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比；;测定步骤;多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸(Carboxyl-terminal)。

在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。;Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP）。

在酸性条件下水解，得到黄色DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不同的DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。;Sanger试剂(DNFB)标记N末端;②Edman降解法(I);Edman降解法(II);氨基酸的鉴定、分离纯化;在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与N-端氨基酸的游离氨基作用，得到丹磺酰-氨基酸。

此法的优点是丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度可以达到1?10-9mol。;氨肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的N-端逐个地向里水解。

根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残基顺序。

最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶，水解以亮氨酸残基为N-末端的肽键速度最大。;此法是多肽链C-端氨基酸分析法。多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。

;羧肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的C-端逐个的水解。根具不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而知道蛋白质的C-末端残基顺序。

目前常用的羧肽酶有四种：A,B,C和Y；A和B来自胰脏；C来自柑桔叶；Y来自面包酵母。

羧肽酶A能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸残基；B只能水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键；Y都能水解。;此法