分子诊断学第十一章单基因遗传性疾病的分子诊断.pptx

单基因遗传性疾病的分子诊断;分子诊断;基因结构异常;（1）DNA分子杂交技术

（2）PCR技术为基础的DNA诊断，特别是定量PCR和实时PCR的应用

（3）生物芯片（biochip）技术为代表的高通量密集型检测技术;发展趋势;遗传性疾病;基因突变;分子诊断技术：;基因诊断的策略;;DNA诊断;第一节血红蛋白病;血红蛋白的构成;（一）α珠蛋白基因

;（二）β珠蛋白基因

;血红蛋白病;结构异常：异常血红蛋白

（镰状细胞贫血）;镰状细胞贫血由β链基因点突变引起，该病的主要原因是因为珠蛋白的β基因发生单一碱基突变，正常β基因的第6位密码子为GAG，编码谷氨酸，突变后为GTG，编码缬氨酸，成为HbS。;;（二）镰状细胞贫血的分子诊断方法;MstII;;已知突变Gene部位和性质，合成寡和苷酸探针，32P标记，进行SouthernBlot杂交/斑点杂交。

NormalβΑGeneProbe

MutationβSGeneProbe;;地中海贫血的分子诊断;;由于以下基因突变导致α地中海贫血

①点突变

②移码突变

③无义突变

④mRNA加尾信号突变

⑤终止密码子突变;α地贫的Gene诊断

α基因不同程度的缺失引起不同类型的α地贫，α基因缺失1～4个。正常Gene组用BamHI切割，可得到14kb的片段，而缺失一个αGene时可得到10kb片段。

;;分子诊断方法;（2）Southern印迹法;β地中海贫血;β地中海贫血;在b珠蛋白基因第2内含子第654位核苷酸C→T突变（IVS-II-654C→T，简称b654），是中国人所特有的，而且是最常见的b地贫基因突变之一，占中国人b地贫总数的17%。;PCR和点突变基因检测技术成为β地中海贫血基因诊断的主要手段。目前常用的检测方法有：

PCR-RDB法

PCR-ASO法：优点是灵敏、准确，缺点是一次杂交只能检测一种突变。

等位基因特异性PCR

芯片技术;b654mRNA的剪接模式;;第二节肌营养不良症;;DMD/BMD患儿的临床表现;一、抗肌萎缩蛋白基因结构;二、DMD/BMD的分子诊断;血友病是一种遗传性出血性疾病。发病原因是由于患者的血液中先天缺乏某种因子，根据缺乏因子的不同分为三种类型：血友病甲（缺乏凝血因子VⅢ，又称血友病A）、血友病乙（缺乏凝血因子Ⅸ，又称血友病B）和血友病丙（缺乏凝血因子Ⅺ）。血友病甲和血友病乙均属X性联隐性遗传，一般由女性传递，男性发病。血友病丙较少见，为常染色体不完全隐性遗传，男女均可发病。通常所说的血友病是指血友病甲。

;一、甲型血友病及其分子诊断;（二）甲型血友病的分子诊断;二、乙型血友病及其分子诊断;（二）乙型血友病的分子诊断;第四节其他遗传性疾病;二、Wilson’s病及其分子诊断;三、G6PD缺乏症及其分子诊断

（一）G6PD的基因结构

G6PD基因位于x染色体长臂末端（Xq28），基因全长20114bp，由13个外显子和12个内含子组成，编码的G6PD含515个氨基酸残基。最常见的基因突变型是1376G→T、1388G→A和95A→G。

(二)G6PD缺乏症的基因诊断

常利用扩增阻滞突变系统(amplificationrefractorymutationsystem,ARMS)法、PCR-RFLP法、PCR-ASO法、PCR-SSCP及DNA序列测定等方法。;四、Huntington病及其分子诊断

（一）Huntington病的基因结构及其发病机理

Huntington病的基因位于4p16.3A。突变根源是染色体上有一段不稳定的(CAG)n三核苷酸的重复序列，CAG重复范围在正常的染色体为11～34个拷贝。而在Huntington病患者的染色体上，重复长度为36～121个拷贝，平均45个拷贝。

（二）Huntington病的基因诊断

Huntington病的99.0%有CAG重复长度的扩增，通过PCR-ASO法检测Huntington病基因中的CAG重复的长度进行Huntington病的诊断。;五、脆性X综合症及其分子诊断

脆性X智力低下基因位于Xq27.3，编码一个RNA结合蛋白。在第一个外显子内发现了一个CGG三核苷酸的重复序列，正常人该序列的拷贝数为6～50，脆性X综合症患者的拷贝数大于200，最多可达2000以上。当拷贝数大于230时，FMR1基因5′端发生高度甲基化，转录被关闭，最终该RNA结合蛋白合成减少是造成这种综合征临床表现的根本原因。;主要通过Gene和DNA多态的连锁分析作出诊断。

连锁分析是基于遗传标记与Gene连锁，子代是否获得遗传标记间接地判断做出诊断。