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红细胞凝集试验（HA）与红细胞凝集抑制试验（HI）

用疫苗按一定免疫程序进行免疫接种是控制鸡病流行的主要途径之一，这种观点

已被广大养殖户接受并引起足够重视。但鸡群免疫抗体的产生及维持时间受到鸡

群免疫应答能力、所用疫苗种类、免疫方法、免疫次数、疫病流行状况等方面的

影响，良好的免疫接种不等于鸡群能够产生良好的保护力。因而通过对鸡群进行

抗体监测，及时检查鸡群的免疫状态、疫苗使用效果，为制定合理的免疫程序提

供依据就显得非常重要。通过对广大养殖户的大量调查发现，由于缺乏有效的监

测手段，养殖户普遍存在盲目免疫的现象。因此，建立合理的抗体监测制度，开

展免疫抗体监测工作，已经成为我们当前养鸡生产中急需开展的一项重要工作。

下面将抗体监测所需设备及监测过程向大家做一说明。

一、实验用设备：

1、离心机1台*（3000转离心红细胞）

2、冰箱1台*（存放抗原）

3、振荡器1台*（振荡96孔V型板）

4、抗原新城疫（ND）、减蛋（EDS）、流感（AI）抗原，从正规厂家进。

5、96孔V型板稀释血清清洗后可重复使用

6、八道移液器1把（5-50微升稀释血清）

7、吸头和八道移液器配套使用，清洗后重复使用）

8、积液槽配制4个单位抗原及盛放生理盐水加样用

9、一次性采血管采血用

10、2毫升注射器采血用

11、红细胞非免疫鸡心脏采血或免疫鸡也可，但需离心5次后使用。

12、柠檬酸三钠配制3.8％抗凝剂用

13、重铬酸钾配制清洁液用

14、硫酸配制清洁液用

15、吸管1毫升、10毫升

16、吸耳球和吸管配套使用

17、针头9*13（采雏鸡）、9*25（采大鸡）

18、蒸馏水当地买。清洗96孔V型板、吸头用

19、10毫升离心管离心红细胞用（塑料制）

20、生理盐水做血清稀释液用、配制4单位抗原

二、实验前的准备：

1.抗原：从指定厂家购买稳定浓缩抗原。

2.抗凝剂的配制：用天平称量3.8克柠檬酸三钠，溶入100ml生理盐水中，待溶

解完全后即可使用。

3.1％红细胞悬液：由鸡心脏或翅静脉采血，放入加有抗凝剂的离心管内（按抗

凝剂：全血＝1：2的比例），迅速混匀。在离心机中以3000转/分离心5分钟，

用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加生理盐水，慢

慢混合均匀，再在离心机中3000转/分离心5分钟，弃去上清液，再加生理盐水

混匀，如此反复离心4～5次，最后一次离心后的红细胞，弃去上清液，即为红

细胞泥。放入4℃冰箱中可保存2—3天。使用时用1ml吸管吸取0.1ml红细胞

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泥，然后加入9.9ml的生理盐水，此即1%红细胞悬液。现用现配。

4.被检血清：每只鸡心脏或翼下采血0.5-1ml,静置或离心，待血清析出后备用。

5.吸管清洁液的配制：使用1%的稀硫酸溶液。水10公斤，硫酸100毫升，将硫

酸慢慢倒入水中，不断搅拌，操作时必须戴手套，口罩。

6.96孔V型板和微量滴头清洁液的配制：重铬酸钾79克，水1000ml，硫酸100ml，

将重铬酸钾磨碎，溶解于水中，然后慢慢加入硫酸100ml，不断搅拌，切不可将

重铬酸钾水溶液倒入硫酸中，以防爆炸，操作时必须戴手套，口罩。

7.血清稀释液：为灭菌的生理盐水。

三、实验过程：

原理：某些病毒（如新城疫、减蛋、流感）能够与鸡红细胞发生凝集，此即为红

细胞凝集现象。这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制，即红细胞凝集

抑制试验（HI）。

应用：1、检测血清中的抗体水平，确定免疫时机。2、免疫后及时监测，确认免

疫效果。3、辅助诊断病毒性疾病。

包括血凝（HA）试验、抗原校正和血凝抑制（HI）试验三步：

（一）血凝（HA）试验：采用96孔V型反应板，测定抗原效价

1、首先用微量移液器向反应板的每孔加生理盐水25微升。

2、用微量移液器吸取待测抗原25微升于第一孔中并挤压6次混合，后吸出25

微升至第2孔，依次倍比稀释到第11孔，弃去25微升。

3、微量移液器再吸取1%红细胞悬液依次加入各孔，每孔25微升。

4、置于微量振荡器上振荡1分钟。

5、室温静置30分钟后观察结果。

6、结果