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微生物实验报告之
α-淀粉酶产生菌的生长曲线绘制及酶活测定
08生物技术二班
李晓飞
2010-4-22
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α-淀粉酶产生菌的生长曲线绘制及酶活测定
李斌、李晓飞、胡腾根、代世红、张慧琼（北方民族大学宁夏银川750021）
摘要：从土壤中分离一株芽孢杆菌，在淀粉培养基中将其培养一段时间后，滴加
碘液可出现明显的水解圈。现欲对此菌株进行研究，需对其进行生长曲线的绘制
和淀粉酶活性的测定，本实验采用液体发酵培养法，绘制其26小时的生长曲线，
用OD值表示，采用中华人民共和国轻工行业标准工业酶制剂通用试验方法测量其
72小时内的酶活变化曲线。
关键字：芽孢杆菌、生长曲线、α-淀粉酶活性
1、器材及试剂
1.1器材
显微镜、超净工作台、冰箱、高压灭菌锅、722s分光度计、恒温水浴锅、摇床、
移液枪、酒精灯、接种环、移液管、三角瓶、玻璃棒、烧杯、容量瓶、试剂瓶、
试管、量筒、洗耳球、PH试纸等。
1.2试剂
1.2.1原碘液称取碘11g,碘化钾22g，用少量水使碘完全溶解，然后定容至
500ml,贮于棕色瓶中。
1.2.2稀碘液吸取原碘液2.OOmL，加碘化钾20g用水溶解并定容至500mL,贮
于棕色瓶中。
1.2.3可溶性淀粉溶液称取可溶性淀粉2.000g,用水调成浆状，在搅动下缓缓
倾人70mL沸水中，然后以30mL水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并人其中，加热
至完全透明，冷却，定容至lOOmL。此溶液需要当天配制。
1.2.4磷酸缓冲液(pH=6.0)称取磷酸氢二钠45.23g、柠橄酸8.07g，用水溶解
并定容至10OOmL,配好后用pH试纸较正。
1.3培养基
牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，PH7.0——7.4，定容
至1000ml，于121℃灭菌20min。
2、生长曲线的绘制
2.1准备工作及实验过程
2
2.1.1取一个盛有100ml已灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基的三角瓶，在超净工
作台中接入一环芽孢杆菌菌体，于30℃摇床中培养18小时。
2..1.2用移液枪量取3m1上述菌液作种子液，接入盛有150ml已灭菌的牛肉膏蛋
白胨液体培养基的三角瓶中，在摇床上相同位置30℃振荡培养，并立即取10ml
菌液为0时的增殖状态，之后于培养2、4、6、8、10、12各取10ml菌液，用没
接种的培养液为空白对照，设三个平行，将上述菌液于波长600nm处比色，测
其OD值。于12小时时用上述方法接入另外一瓶菌，测其14、16、18、20、22、
24、26小时的数据。
2.2实验数据（见表1、图1）
表1：不同时刻生长曲线测量数据
时间024681012
10.0410.0620.2760.9071.1681.4221.680
20.0380.0620.2740.9041.1611.4171.672
30.0390.0720.2820.9131.1711.4231.682
平均值0.0390.0650.2770.9081.1671.4211.678
时间14161820222426
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