DB15T 3699—2024马铃薯种质资源离体培养及保存技术规程.docx

ICS65.020.20CCSB23

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T3699—2024

马铃薯种质资源离体培养及保存技术规程

Technicalcodeofpracticefortissuecultureandpreservationofpotatogermplasmresources

2024-10-25发布2024-11-25实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会(SAM/TC20)归口。

本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。

本文件主要起草人：曹春梅、逯春杏、王晓娇、许飞、韩艺、张翠玲、胡嘉鑫。

马铃薯种质资源离体培养及保存技术规程

1范围

本文件规定了马铃薯种质资源离体培养技术规程及保存的茎尖剥离（脱毒）材料的选取、脱毒与培养、试管苗保存、试管薯诱导等技术要求。

本文件适用于马铃薯种质资源离体培养及保存。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T401脱毒马铃薯种薯（苗）病毒检测技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

茎尖剥离apicalstripping

应用茎尖分生组织培养技术，选取马铃薯芽顶端部分（直径0.1mm～0.3mm），带有1～2个叶原基的茎尖分生组织，移植到诱导培养基中培养。

3.2

离体培养isolatedculture

选取马铃薯茎尖、茎段或其他离体组织通过无菌操作接种在特定的培养基上，在人工控制条件下进行培养，已获得的完整植株可保持其体内所含遗传物质的完整性，从而达到保存目的的方法。

4茎尖剥离（脱毒）材料的选取

选取无类病毒(PSTVd)、健壮且具备马铃薯品种（系）典型农艺性状植株的顶芽、腋芽或健康块茎的茎尖作为材料。

5脱毒与培养

5.1脱毒材料的预处理

收获脱毒材料，将块茎放置在温室或培养箱内进行催芽处理。待芽萌发2cm时，在温度35℃~37℃进行高温钝化处理15d，光照/黑暗12h，光照强度2000Lx。

5.2培养基的制备

选用MS+0.5mg/L萘乙酸+0.1mg/L6-苄氨基腺嘌呤或MS+0.2mg/L萘乙酸配方配制培养基，培养基pH值调至5.8~6.0。分装后在121℃条件下，灭菌25min~30min，待培养基冷却凝固，观测24h，确保无菌后备用。

5.3脱毒材料的消毒处理

5.3.1取材

选取经处理的马铃薯块茎上顶芽或侧芽组织2cm左右，或选取经处理的马铃薯植株顶芽、腋芽2cm左右作为脱毒材料。

5.3.2清洗

将选取的脱毒材料放入玻璃烧杯内，放在水龙头下，采用小水流，用毛刷轻刷尘土，随后在烧杯上扎块纱布，置于流动的小水流下冲洗时间30min。

5.3.3消毒

在超净工作台内，将脱毒材料放置在灭菌的烧杯内，先用75%的酒精浸泡30s，随后用无菌水冲洗3遍，控干水分后再用5%漂白粉溶液或10%次氯酸钠溶液中浸泡5min~10min；最后用无菌水冲洗3遍，滤干水分备用。

5.4茎尖剥离与接种

解剖镜下，用无菌解剖针或手术刀剥取带有1~2个叶原基的茎尖分生组织，剥离后的茎尖分生组织直径0.1mm~0.3mm，接种到灭菌的培养基中进行培养，培养瓶或试管外壁写好编号和日期。

5.5茎尖培养条件

光照培养14h，保持24℃,光照强度1500Lx~2000Lx，暗培养10h，保持18℃。5.6茎尖成苗

待愈伤分化成苗后，及时剪出生长点，转移到MS培养基上。待植株生长到3~4个叶片时，单节切断快繁，同时标明该种质资源品种（系）名称、日期等信息，常规培养。

5.7病毒检测

按照NY/T401对扩繁苗进行PVX、PVY、PVS、PVA、PVM、PLRV病毒检测。

6试管苗保存

6.1保存培养基配方

MS+20g/L甘露醇，pH值5.8~6.0。6.2保存条件

将用保存培养基扩繁的试管苗置于温度22℃~24℃、光照强度2000Lx~3000Lx、光照时间16h/d条件下培养2w，