乳及乳制品中维生素A、D、E的测定 在线固相萃取-中心切割二维液相色谱法.docxVIP

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乳及乳制品中维生素A、D、E的测定在线固相萃取-中心切割二维

液相色谱法

1范围

本文件规定了乳及乳制品中维生素A、D、E的测定原理及方法。本文件适用于乳及乳制品中维生素A、D、E的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

样品经皂化（含蛋白或淀粉样品需酶解）后，直接进二维液相色谱系统，经在线固相萃取装置去除高浓度的碱和水溶性成分，经一维液相色谱分离并分析维生素A、E同时对维生素D进行净化和转移，再经过阀切换，将维生素D进入二维液相色谱进行分离和分析。

5试剂和材料

5.1试剂

5.1.1无水乙醇（C2H5OH）：色谱纯

5.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯

5.1.3甲醇（CH3OH）：色谱纯

5.1.4甲酸（HCOOH）：色谱纯

5.1.5抗坏血酸（C6H8O6）：分析纯

5.1.62，6-二叔丁基对甲基苯酚（BHT）：分析纯

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5.1.7磷酸：分析纯

5.1.8氢氧化钾（KOH）：分析纯

5.1.9甲基叔丁基醚（MTBE）：色谱纯

5.1.10淀粉酶：活力单位≥100U/mg

5.2试剂配制

5.2.150%无水乙醇溶液：量取50mL无水乙醇，加水定容至100mL。

5.2.2氢氧化钾溶液（50g/100g）：称取50g氢氧化钾，加入50mL水溶解，冷却后，储存于聚乙烯

瓶中。

5.3标准品

5.3.1维生素A标准品

视黄醇（C20H30O，CAS号：68-26-8）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

5.3.2维生素E标准品

5.3.2.1α-生育酚（C29H50O2，CAS号：10191-41-0）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书

的标准物质。

5.3.2.2β-生育酚（C28H48O2，CAS号：148-03-8）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的

标准物质。

5.3.2.3γ-生育酚（C28H48O2，CAS号：54-28-4）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的

标准物质。

5.3.2.4δ-生育酚（C27H46O2，CAS号：119-13-1）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的

标准物质。

5.3.3维生素D标准品

5.3.3.1维生素D2标准品：钙化醇（C28H44O，CAS号：50-14-6），纯度98%，或经国家认证并授予

标准物质证书的标准物质。

5.3.3.2维生素D3标准品：胆钙化醇（C27H44O，CAS号：511-28-4），纯度98%，或经国家认证并授

予标准物质证书的标准物质。

5.4标准溶液配制

5.4.1维生素A标准储备溶液（0.500mg/mL）

准确称取25.0mg维生素A标准品，用无水乙醇溶解后，转移入50mL容量瓶中，定容至刻度，此溶液浓度约为0.500mg/mL。将溶液转移至棕色试剂瓶中，密封后，在-20°C下避光保存，有效期1个月。临用前将溶液回温至20°C，并进行浓度校正（校正方法见附录A）。

5.4.2维生素E标准储备溶液（1.00mg/mL）

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分别准确称取α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚标准品50.0mg，用无水乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶定容，此溶液浓度为1.00mg/mL。将溶液转移至棕色试剂瓶种，密封后，在-20°C下避光保存，有效期6个月。临用前将溶液回温至20℃,并进行浓度校正（校正方法见附录A）。

5.4.3维生素D标准储备溶液(100μg/mL)

准确称取维生素D2标准品10.0mg，用无水乙醇溶解后，转移至100mL棕色容量瓶定容，得到维生素D2标准储备液（浓度100μg/mL）。准确称取维生素D3标准品10.0mg，用无水乙醇溶解后，转移至100mL棕色容量瓶定容，得到维生素D3标准储备液（浓度100μg/mL）