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第十一章遗传工程;什么是遗传工程?;工具酶;限制性内切酶II及其产生的3种不同末端;同切酶和同粘酶;SmaI
5′...CCC^GGG...3′
3′...GGG^CCC...5′;连接酶及其对底物的要求:
T4Ligase,EcoliLigase;聚合酶(polymerase):DNA聚合酶I,klenow片段,Taq,Pfu,末端转移酶
外切核酸酶(exonuclease):exoIII,S1核酸酶,DNaseI
脱磷酸酶(dephosphatase):碱性磷酸酯酶CIP
磷酸化酶,激酶(kinase)
逆转录酶(reversetranscriptase)
RNaseH,RNaseA
甲基化酶(methylase);载体及其构成基本要素;常用载体;宿主;常用宿主;lacZ;;;;第11章遗传工程;第11章遗传工程;如何提高克隆效率?;问题:;不依赖于内切酶和连接酶的体外重组
----位点专一性重组
(依赖于短片段同源序列的重组);LoxP;Transform;第11章遗传工程;第11章遗传工程;新鲜组织研磨或匀浆;;;筛选DNA文库;探针标记;变性;;第11章遗传工程;;第11章遗传工程;;InsertedDNAcoding
Proteinfordetection;PCR技术及其应用;第11章遗传工程;第11章遗传工程;第11章遗传工程;第11章遗传工程;;其他常用分子生物学技术;转基因动植物和基因治疗;iRNA作用原理;;5′???CAUG???3′?????mRNA
3′???GUAC???5′?????AntisenseRNA;转基因植物实例;基因治疗;血友病B的基因治疗;谢谢聆听!
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