细菌学检验基本技术.ppt

**间歇蒸汽灭菌法（fractionalsterilization）利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭所有微生物，包括芽孢。方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是使芽孢发育成繁殖体。若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。关于细菌学检验基本技术**主要内容第一节样本的采集与送检原则第二节细菌的分离培养方法第三节细菌的形态结构检查法第四节细菌的生化反应检查法第五节细菌的血清学检验第六节细菌毒素的检测第七节细菌数量的测定第八节细菌L型检验第九节微生物菌种的保藏及保管第2页,共30页，星期六，2024年，5月*第一节样本的采集与送检原则一、细菌学检验样本的类型正常人体样本，如排泄物、血液、血清等食品、水产品、化妆品、药品、消毒及卫生用品、医疗用品及环境（水、土壤、空气，各种物品）等卫生样本，包括常规卫生评价、公共卫生事件、环境监测、委托送检等标本临床各种感染材料（试剂、样品、耗材、医疗废弃物等）动物尸检或感染材料。第3页,共30页，星期六，2024年，5月*二、采样的一般原则（1）无菌原则采样用具要无菌且在有效期内；采样操作程序要无菌；如果采样部位需要经过皮肤和粘膜时，做好外表面的消毒，防止污染。密封送检（2）选择正确的采样时间分离病原菌时，应早期采样；最好是病人发病早期、急性期或症状典型时；用药前采样，或停药24h采样，或下一次用药前采样用于血清学诊断时，急性期及恢复期采集双份血清。第4页,共30页，星期六，2024年，5月*（3）选择正确的采样部位根据感染特点、病程发展及目的菌可能存在的部位，选择合适的解剖部位采样。（4）采集足够量样本采样量不能太少，过少样品会导致假阴性结果；卫生样本要具有代表性，否则会影响评价的准确性。（5）多样性采集感染进程复杂的，应多部位或多时间段采样，以防漏检。（6）做好采样记录记录样本类别、采样时间、地点、采样量及采样人等信息。第5页,共30页，星期六，2024年，5月*三、样本送运原则（1）选择适当的温度和时间送检时间长或温度高，菌相将发生改变，影响结果的准确性；应遵循尽快送检的原则；常规细菌学检查，不超过2h，最好1h内，保存在4℃中不超过24h。含有脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌等的样品，低温自溶，应在25℃常温送检或用便携式培养箱送检第6页,共30页，星期六，2024年，5月*（2）选择正确的气体环境针对厌氧菌样本，注意隔绝空气氧；如使用专门的厌氧采样瓶或试管，或人为的排出空气，或直接接种于厌氧培养基或放在厌氧袋、厌氧盒中（3）保持密闭状态第7页,共30页，星期六，2024年，5月*便携式恒温培养箱便携式冷藏保温箱厌氧培养袋厌氧罐厌氧瓶第8页,共30页，星期六，2024年，5月*第二节细菌的分离培养方法细菌的分离培养提供细菌生长所需的各种条件（营养、温度、湿度、酸碱度和气体），从样本中获得该种细菌活的纯化物的过程。主要内容包括培养基制备、细菌接种方法、细菌培养方法、细菌的生长现象第9页,共30页，星期六，2024年，5月*第10页,共30页，星期六，2024年，5月*一、培养基的制备培养基是指经人工配制，将供细菌生长繁殖需要的各种营养物质按比例配制而成的基质，可用于细菌的分离纯化、传代、鉴定、菌种保存等。第11页,共30页，星期六，2024年，5月*（一）培养基的主要成分及其作用P261.营养物质：碳源、氮源及其它营养物质（蛋白胨、肉浸液、牛肉浸膏、糖类、血液、鸡蛋、动物血清、酵母粉、生长因子、无机盐类）。2.水分：常用蒸馏水。3.凝固物质：琼脂、明胶4.抑制剂和指示剂：如胆盐、抗生素、酸碱指示剂、氧化还原指示剂等。第12页,共30页，星期六，2024年，5月*（二）培养基制备的一般程序调配矫正pH过滤澄清分装灭菌检定保存称量、溶解氢氧化钠、盐酸（0.1mol/L、1mol/L）高出所需pH0.1-0.2个单位先调pH，沸水加热5-10min，冷却后过滤；滤纸、绒布等过滤液体：不超过容器2/3；斜面：1/５管；半固体培养基：1/3管；高层斜面：1/4～1/3管；平板：13~15ml耐高压：121℃，15min含糖：115℃，15min鸡蛋、牛奶等：间歇灭菌3天3次不耐高温的血清、尿素等：滤过除菌外观：完整性、水分浸入、色泽异常、培养基外溢