植物组织培养 小抄.docVIP

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组培:无菌和人工控制环境条件下,用适当培养基,对离体植物器官组织c及原生质体培养,,使其再生c或完整植株。依据:植物c全能性。

细胞全能性:有完整c核的植物c具有全部遗传信息,在一定条件下有发育成完整植株的潜力。条件:组织器官离体;给予所需营养条件。

愈伤组织:在培养基上由培养物产生的无序生长且没有一定结构的薄壁c团。

外植体:组培中,植物体上取下来进行离体培养的组织器官。

脱分化:高度分化的植物器官组织或c,经离体培养,产生愈伤组织。

再分化:脱分化产生的愈伤组织重新分化成器官或组织。

初代培养:从大田取回第一次街道培养基上的培养。

继代培养:通过更换新培养基及不断切割分离进行的连续多代培养。

生根培养:很多无根材料要进行的培养。

实验室:准备室、无菌操作室、培养室和温室。

洗涤:重铬酸钾、洗涤剂、超声波洗净法。

灭菌:干热:鼓风干燥箱(烘箱)烘烤灭菌,150℃,2h玻璃器皿;湿热:高压蒸汽灭菌,121℃,0.1mpa,15-20min培养基;熏蒸:药物熏蒸,甲醛内加入KmnO4,百菌清,硫磺,培养室接种室;过滤:使溶液通过有微孔滤膜的漏斗,孔径0.3-0.45um,真空泵抽滤,滤液无菌,无菌液体培养(不耐高温活性物质);药剂:表面消毒培养材料;灼烧:酒精灯灼烧,接种器具灭菌;射线:紫外线照射,15-30min,接种时关闭,室内灭菌。

无菌操作:工作人员准备;接种室及工作台灭菌,紫外30min;工作台消毒70%酒精;点燃酒精灯。

培养基:维持离体c生存生长的溶液。无机盐:大量元素:N:用量最多,硝态和铵态,KNO3,NH4NO3;P:参与能量贮存转化,核酸和蛋及c壁重要组分,磷酸根形式添加;K:调节c渗透压,促进胡萝卜不定胚分化;Ca,S,Mg:CaCl2,Ca(NO3)2,碳源,MgSO4作S源和Mg源;微量Fe、Mn、Zn、B、Mo、Cu、Co,需量甚微,稍多即毒害,Fe用量较多,促进组织中叶绿素合成和延伸伸长。2.有机化合物:糖类:合成有机物重要碳源、维持渗透压,常用:蔗糖(3%)、葡萄糖、果糖、麦芽糖;维生素类:直接参与酶合成,VB1、VB6、VB12、VB9(叶酸,促进培养物生长,参与嘌呤嘧啶合成)、肌醇(提高VB1效果,促进愈伤组织形成和不定芽、不定胚分化);有机含氮化合物。3.植物生长调节物质:生长素:2,4-D促进愈伤组织,生长素/c分裂素,高利于生根;c分裂素:6-苄基腺嘌呤,根尖合成向上运输,促进c分裂和器官分化,促进侧芽分化生长,抑制顶端优势,延缓组织衰老;赤霉素(GA3):促进器官形成;脱落酸(ABA):抑制生长促进休眠,体胚发育成熟;多效唑(PP333):促进壮苗。4.附加物:琼脂:组培支持物;琼脂糖:改善培养物供氧状况;聚乙烯吡咯烷酮(PVP),VC,硝酸银,防止材料褐变;活性炭:吸附有害物;马铃薯提取液、香蕉乳、椰乳(缓冲)。

IAA:诱导脱分化产生愈伤,促进培养物生长,诱导不定胚。

MS培养基:无机盐浓度高,尤其铵盐硝酸银,能满足快速增长的组织对营养的要求,应用广泛。不适合生长缓慢、对无机盐浓度要求低的。

母液制备:大量元素母液:配置原溶液的10-50X,依次溶解,混合定容;微量元素母液(一般100X);铁盐母液;有机物母液;生长调节物母液。注意:倍数不易过高,避免浪费,避免影响稀释准确度;2-4℃冰箱保存,配置时间不宜过长,否则易出现沉淀和微生物污染。配置过程:按配方浓度将母液实际用量依次加入大量筒,将蔗糖溶解加入,蒸馏水定容到所需V,加琼脂溶解,调整ph,氢氧化钠或稀盐酸进行调整,分装到培养器皿中,封口,高压锅灭菌。培养基制备:取出母液按序放好,将有机营养物质贮液溶化待用;取烧杯加纯水、母液;加生长调节剂和蔗糖,定容;倒入容器,加琼脂,加热使其溶解;调PH;培养基分装到培养皿;高压灭菌;冷却凝固

取材原则:再生能力强;遗传稳定性好;外植体来源丰富;外植体易灭菌。影响因素:部位,季节,器官生理状态和发育年龄,大小。

灭菌要求:消灭病毒,减少损伤。

污染类型:细菌,真菌。原因:培养基灭菌不彻底,操作人为带入,操作环节环境不清洁。控制:改善环境条件;严格执行灭菌操作;严查接种材料;常查灭菌设备;检查培养容器

消毒剂:70%-75%酒精,有较强穿透力和灭菌作用,杀伤作用大。次氯酸钠:较好的灭菌剂,释放出活性氯离子杀死细菌。1%,5-30min,灭菌力很强不易残留,对环境无害,碱性强,有破坏作用,处理时间不宜过长,漂白粉中为5%-10%或饱和溶液,效果好,是常用灭菌剂。升汞:常用0.1%-0.2%,2-15min,效果极佳,易残留,灭菌后应多次冲洗,危害大,毒性强,尽量避免使用。

器官再分化方式:器官发生型,胚胎发生型。

分类:据外植体来

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