临床微生物学检验 第15章厌氧菌.pptx

C15学习目标;第15章厌氧菌

;分类

G+有芽孢：梭菌属：破伤风杆菌、产气荚膜杆菌、

肉毒杆菌、艰难梭菌、溶组织梭菌、

败毒梭菌、诺维梭菌

G+无芽孢：丙酸、双歧、乳、优、杆菌属、

放线菌属、蛛网菌属

G-无芽孢：类杆菌属、普雷沃菌属、紫单胞菌属、

梭杆菌属、纤毛菌属、沃廉菌属、月形单胞菌属

G+球菌：消化球菌属、消化链球菌属、厌氧性链、葡萄球菌

G-球菌：韦荣菌属、氨基酸球菌属、巨球菌属;二、厌氧菌感染的条件

1、局部组织血液供给障碍

BV损伤、烧伤、A硬化、肿瘤压迫、组织水肿

2、皮肤黏膜屏障被破坏

机械或病理性损伤：大面积外伤、刺伤、烧伤、拔牙等

2、各种原因引起机体免疫功能降低

免疫抑制剂、抗代谢药物、放疗化疗的患者、糖尿病、慢肝、手术、老人婴幼儿，长期应用抗生素等

4、菌群失调;三、厌氧菌感染的临床及细菌学指征

1、感染局部有大量气体产生

2、发生在粘膜附近的感染

3、深部外伤（如枪伤动物咬伤后的继发感染）

4、常规血培养阴性的一些感染

5、有特殊分泌物（如恶臭、暗血红色、红色荧光）

6、某些抗生素治疗无效的感染、新近有流产史、胃肠手术后发生的感染

7、细菌形态及培养有特征性变化

如染色不均形态奇特；镜检有菌需氧培养阴性；液体或半固体培养基深部生长;四、厌氧菌感染的微生物学检验

1、标本的采集与运送

原则：

无菌部位无菌操作采集,不应被正常菌群所污染和尽量避免与空气接触,立即送检，及时接种,20～30min处理完毕，最迟不超过2h；室温保存不宜冷冻；仔细观察与详细记录标本的性状。

厌氧培养无价值标本?——（退）P30

不同部位标本采集法?——;运送法？

针筒——液体标本，注意排尽空气针头插入橡皮塞

无氧小瓶——少量脓液标本，瓶内为心脑浸液+还原

剂、真空+N2+CO2、无菌（无色的）

标本充盈法——大量液体标本，充盈溢出驱除空气+密封

组织块——组织块标本，厌氧罐（+酸化硫酸铜钢丝绒）

厌氧袋——床边接种置于厌氧袋内，

（或无菌不透气普通塑料袋内加酸化硫酸铜钢丝绒）

棉拭运送法——紧急备用，两管：A（+CO2）、B（+还

原剂的半固体培养基）;分离和鉴定

;9;3、检验方法

（1）肉眼观察:性状—脓\血\黑\坏死物\气味\颗粒?

（2）直接镜检:形态染色性含菌量

利于培养基的选择

（3）分离培养：初代培养——次代培养

培养基的选择

培养基——新鲜2~4h用完、预还原处理、液体培养基煮沸驱氧

非选择性：牛心浸液或布氏肉汤+酵母浸液+氯化血红素+vitk1+血

如：BAP

选择性：BBE、KVLB、EYA、FS、VS、CCFA、FM等;标本接种——固体/液体两种培养基，每份标本种3个非选择（血）培养基，分置有氧、无氧、CO2环境培养；另接种一种或几种选择性培养基，。

培养方法——

庖肉培养法

焦性没食子酸法(平板法、试管法)

硫乙醇酸钠法

厌氧罐法

气袋厌氧系统

厌氧手套箱;（5）鉴定试验

形态染色

菌落性状——形态大小、色素、溶血、荧光

耐氧试验

快速鉴定：推测性平皿系统、API-20A和Minintek盒

装微量系统、自动微生物鉴定系统...

药物鉴定试验、SPS敏感试验

生化特性——糖发酵、I、S、N、触酶、卵磷脂酶、脂酶、

蛋白溶解、明胶液化、胆汁肉汤生长试验等

气液相色谱技术（GLC）

PCR、基因探针等;厌氧菌在有氧的情况下不能生长。要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。

1．厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。