DB65T3502-2013 绵羊耳缘皮肤组织成纤维细胞体外培养技术规程.pdf

ICS65.020.30

B43

DB65

新疆维吾尔自治区地方标准

DB65/T3502-2013

绵羊耳缘皮肤组织成纤维细胞体外培养

技术规程

TheTechnologyProceduresofSheepEarSkinFibroblastinvitroCulture

2013一08-10发布2013-09-10实施

新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布

0865/T3502-2013

目ljJ§

本标准根据GB/Tl.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》要求编写。

本标准由新疆维吾尔自治区畜牧厅提出。

本标准由新疆维吾尔自治区畜牧厅归口。

本标准由新疆畜牧科学院畜牧科学研究所负责起草。

本标准主要起草人：田可川、黄锡霞、詹振宏、吴伟伟、徐新明、田月珍、张艳花、哈尼克孜、

狄江、石刚、付雪峰、于丽娟、玛尔孜亚、阿扎提、拉扎提、阿米娜、

马依拉·吐尔逊、艾买提·买买提、刘春洁。

0865/T3502一－2013

绵羊耳缘皮肤组织成纤维细胞体外培养技术规程

1范围

本标准规定了绵羊耳缘皮肤组织的成纤维细胞体外培养的术语和定义、工作区条件、材料与方法。

本地方标准适用于绵羊耳缘皮肤组织成纤维细胞原代培养、细胞冻存、细胞复苏、细胞传代等。

2规范性引用文件

下列文件对于本表准的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标

准。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本标准。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

3术语及定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1成纤维细胞们broblast

以绵羊组织或胎儿为材料，体外培养、分离出的梭形或不规则形细胞。胞质近中央处有椭圆形胞核，

胞体一般铺展很开，细胞之间排列疏松，有较大细胞间隙。

3.2超低温保存cryopreservation

在液氮中冷冻保存遗传物质的技术。

3.3原代细胞培养primaryce门culture

将成纤维细胞在模拟体内生存环境中进行培养，使细胞生长增殖达到可传代状态的培养方法。

4工作区条件

工作区一般要由准备室、缓冲间、无菌室、细胞保存室组成。

5材料与方法

5.1材料

成年绵羊耳缘皮肤组织。实验室进行处理。

5.2药品与试剂

5.2.1药品

Dulbecco’S改良培养基CDulbecco’SModifiedEaglesMedium,DMEM）粉剂；膜蛋白粉末0:250);

胎牛血清（FetalBovineSerum,FBS);Dulbecco’s磷酸盐缓冲盐水CDulbecco’sPhosphate-Buffered

Saline,DPBS）溶液；控乙基赈嗦乙磺酸CHydroxyethylpiperazineethanesulfonicacid,Hepes）。

5.2.2试剂及配制方法

实验用水按照GB/T6682-2008《分析实验室用水规格和试验方法》中一级用水的要求制备。

5.2.2.1DMEM培养液配制方法

先往烧杯中放入lOOmL～200mL高温灭菌的DP邸，称量药品，待前一药品融后，再称下一药品，补足

DPBS至1000此，搅匀，用0.22川微孔针式滤器过滤除菌，置于4℃冰箱保存。

5.2.2.2膜蛋白酶溶液配制方法