2021年免疫血清的制备实验报告 .pdf

试验汇报

试验名称多克隆抗体制备一（抗血清制备）试验日期

院系专业班级

姓名学号

一、试验目

了解免疫原理,掌握免疫方法和抗血清制备技术。

二、试验器材

试剂:

酒精棉球、NDV灭活油乳剂疫苗、麻醉剂

器材:

兔笼、注射器、剃毛剪、手术刀、止血钳、手术剪（组织剪、眼科剪）、动脉夹、眼

科剪、动脉导管、纱布、棉线、细线、培养箱、冰箱、结扎细线、离心机、温箱

三、试验原理

1.机体特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产体液免疫和细胞免疫过程。一个抗原能

否引发抗体反应,首先取决于抗原分子表面有没有特异性化学结构——抗原决定簇,其次取

决于机体有没有对应免疫活性细胞。

2.将含有免疫原性物质注入健康动物体内后,抗原可刺激机体对应B细胞增殖、分化

形成浆细胞并分泌特异性抗体。抗原进入机体经过一定潜伏期,抗体效价逐步上升,达成高

峰后,能维持一短临时期,以后又逐步下降,但当第二次接触相同抗原时,抗体上升较前次

为快,高峰时效价也比前次为高。抗体连续时间也较长,此也称为再次反应。待动物血清中

存在大量抗体时,采集动物血液,分离析出血清,便得到所需抗血清（免疫血清或抗体）。

3.因为抗原性物质通常含有多个抗原决定簇,能够刺激机体产生多个抗体形成细胞克隆,合

成和分泌多种抗原决定簇抗体,免疫血清中实际上是含有多个抗体混合物,所以这种免疫法

取得免疫血清又称为多克隆抗体。

4.多克隆抗体制备是一个复杂过程,为了取得特异性强,效价高抗血清,除了抗原原因外,

还需注意动物品系选择、抗原注射浓度、剂量、次数、间隔时间及注射路径等。对于免

疫原性较弱可溶性抗原（如蛋白质类抗原）要加入佐剂,以增强免疫性。

四、试验过程及步骤

1.免疫接种

1）取一只健康大白兔固定在兔笼中

2）酒精消毒大白兔皮肤后,经过皮下或皮内注射方法接种大白兔,累计注射8-10个位置,每

一处约0.1ml。

3）为提升免疫血清效价,通常需要进行2-3次加强免疫,每次免疫间隔10-15天。然后再接

免疫结束后血清采集过程。

4）注射完成,将大白兔从兔台取下,放回喂养笼。

2.颈动脉放血

1）取一只接种过大白兔固定于兔笼,耳缘静脉注射适宜剂量麻醉剂麻醉。将麻醉后大白兔

固定于兔台,用棉线固定四肢,细线固定门牙于铁柱,使颈部完全暴露。

2）用剃毛剪贴着皮肤减去颈部毛,手术刀在颈部中央切开皮肤约3-4cm,纱布吸去多出血

液。用止血钳提拉住两边皮毛,组织剪将切口扩大至7-8cm。分别剪开黏膜层、肌肉层,用

止血钳扩大开口使之与皮肤一致,游离出颈动脉约2-3cm。

3）用结扎细线2根穿过颈动脉,远心端结扎,近心端备用。动脉夹夹住颈动脉近心端,用眼

科镊手柄处将颈动脉抬起,然后用眼科剪斜向近心端剪开血管,插入动脉导管,两端分别用

预留结扎细线固定,打开动脉夹取血至锥形瓶后密封。

3.取得免疫血清

1）将采集动脉血放到37℃温箱中,静置1小时。

2）在4℃冰箱内放置6-8小时,待血清析出。

3）将析出血清转移至50ml离心管。离心管配平后,在4℃,以rpm转速离心5min。

4）待血清析出后,用移液器将其转移至离心管中离心,离心结束后,上层血清即为免疫血清,

用移液器将其转移到离心管中,放置于-20℃冰箱冻存备用。

五、试验总结

1.多克隆抗体制备很复杂,通常要数次间隔免疫,方便产生更多抗体。还需注意动物品系选

择、抗原注射浓度、剂量、次数、间隔时间及注射路径等。

2.在暴露颈动脉手术过程中,应保持切口在正中位置,所以固定大白兔时就要注意。为了降

低出血量,所以皮肤、黏膜、肌肉要一层层剪开同时用止血钳扩开,在肌肉层最好用手指

撕开,以免剪刀丰富血管造成过量出血。

3.放37度温箱温浴,是为了让血液内纤维蛋白原收缩,降低血清和红细胞粘连,从而使使

血清更轻易与红细胞分离,不易产生溶血现象。

4.在4℃冰箱内放置使血清析出,低温有利于稳定抗体等蛋白质结构,预防其变性而丧失功

效。

六、老师评价