第三章 细胞生物学研究方法课件.ppt

第三章细胞生物学研究方法;第一节细胞形态结构的观察方法;一、光学显微镜技术（lightmicroscopy);显微镜和显微镜的分辨能力:;普通复式光学显微镜技术;荧光显微镜技术（FluorescenceMicroscopy）;激光共焦扫描显微镜技术

（LaserScanningConfocalMicroscopy）;?相差显微镜（phase-contrastmicroscope）

将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞

?微分干涉显微镜（differential-interferencemicroscope）

偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成

明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究

活细胞中较大的细胞器

?录像增差显微镜技术（video-enhancemicroscopy）

计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活

细胞中的颗粒及细胞器的运动

;双目显微镜;正置显微镜;荧光显微镜及其照片;共聚焦显微镜及其显微图像;激光共聚焦原理;暗视野成像原理;二、电子显微镜技术;电镜与光镜的比较;电镜与光镜光路图比较;电子显微镜的基本构造;主要电镜制样技术;透射电镜及其图像;扫描电镜;扫描电镜及其图像;三、扫描遂道显微镜;?装置：扫描的压电陶瓷，逼近装置，电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示系统。

?特点：（1）可对晶体或非晶体成像，无需复杂计算，且分辨本领高。

（侧分辨率为0.1～0.2nm，纵分辨率可达0.01nm）；

（2）可实时得到样品表面三维图象，可测量厚度信息；

（3）可在真空、大气、液体等多种条件下工作；非破坏性测量。

（4）可连续成像，进行动态观察

?用途：纳米生物学研究领域中的重要工具,在原子水平上揭示样本表面的结构。

;第二节细胞组分的分析方法;一、离心分离技术

;第三章细胞生物学研究方法;差速离心:分离密度不同的细胞组分

;第三章细胞生物学研究方法;二、细胞内核酸、蛋白质、

酶、糖与脂类等的显示方法

;三、特异蛋白抗原的定位与定性;?免疫电镜技术：

?免疫铁蛋白技术

?免疫酶标技术

?免疫胶体金技术

应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动态；胞内酶的研究；膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等;四、细胞内特异核酸的定位与定性;原位杂交技术;五、放射自显影技术;六．定量细胞化学分析技术;?流式细胞仪（FlowCytometry）

?主要应用：

用于定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量；

测定细胞群体中不同时相细胞的数量；

从细胞群体中分离某些特异染色的细胞；

分离DNA含量不同的中期染色体。

;流式细胞术;第三节细胞培养、细胞工程与显微操作技术;一、细胞的培养;植物组织培养;二、细胞工程;对细胞生命活动的研究成为当今生命科学发展的瓶颈

;显微操作仪;显微操作示意图;单克隆抗体技术;第三章细胞生物学研究方法;谢谢聆听！