生物化学实验020649.pptVIP

生物化学实验

目录实验一、酪蛋白的制备实验二、酵母蔗糖酶的提取及活力测定实验三、考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度实验四、DNS-Cl法测定N末端氨基酸实验五、凝胶过滤层析分离蓝葡聚糖和重铬酸钾实验六、酵母RNA的分离及组分鉴定实验七、维生素C的定量测定实验八、氨基酸纸层析?准备实验

（熟悉实验室规章制度及注意事项；实验记录/报告；基本操作)2.关于实验报告要用自己的实验记录认真地写出一份实验报告，不得互相抄袭。实验报告的内容:①实验名称②实验目的③实验原理（要写得简洁）④较复杂试剂的配方⑤实验结果及其处理⑦分析讨论⑧同组者姓名标准的实验报告应该简洁明了地给出使别人能够重复你的实验所需要的全部信息。3.值日生职责：卫生、水、电、门、窗?实验一、酪蛋白的制备[实验目的]学习从奶粉中制备酪蛋白的原理和方法，并以此加深对等电点概念的印象。[原理]奶粉的主要干物质成分是酪蛋白——一些含磷蛋白质的混合物。酪蛋白的pI为pH4.7。在处于其pI时，兼性离子/粒子在溶液中的溶解度最低；将牛奶的pH调到pH4.7，就可获得酪蛋白沉淀；用乙醇、乙醇-乙醚混合物、乙醚来洗涤沉淀物，以去除醇溶性和脂溶性杂质，就可得到较纯的酪蛋白。[操作步骤]离心机干燥箱实验二、酵母蔗糖酶的提取及活力测定试剂和器材1、试剂：（1）5mmoL/L磷酸钠缓冲液（pH6.0）（2）0.2mol/L醋酸钠缓冲液，pH4.6（3）1moL/L氢氧化钠（4）5%蔗糖（5）3，5-二硝基水杨酸试剂（6）0.1%葡萄糖标准液2、器材：（1）烧杯、搅拌棒、三角瓶、滴管（2）量筒、移液管、吸耳球、试管（3）天平（4）离心机、内外套管（5）冰箱（6）高活性干酵母粉、硫酸纸、皮筋套葡萄糖标准曲线制作：以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光密度值为纵坐标做出标准曲线。附:722型分光光度计的操作方法及注意事项：（1）基本部件：(2)原理：A=εcl（3）操作方法：①接通电源，打开比色皿暗厢盖，预热20分钟；②旋扭旋至[T]档，调节波长旋扭至所需要的单色光波长，选择相应的放大灵敏度档，再用零位电位器校正电表指针指在零位；③将装有空白液和待测液的比色皿依此放入暗厢内的比色皿架上，此时空白液应位于光路上。盖上暗厢，使光电管见光，旋转光量调节器，使电表指针正确处于100%；④按上述方法连续几次调整零位和使电表指针指在100%，即可进行测定；⑤将旋扭旋至[A]档，此时，若不为0，则调节消光零旋钮。轻拉比色皿定位装置的拉杆，使待测溶液进入光路，此时即可直接读出光吸收值的读数。（2）注意事项：①务必保持比色皿透光面的清洁，不要用手摸比色皿的光滑面，更不要用毛刷刷洗比色皿，以免影响读数的准确；②比色皿外边沾有水或待测溶液时，可先用滤纸吸干，再用擦镜纸擦净；③把比色皿放入比色皿架时，要注意尽量使它们的位置前后一致。分光光度计实验三、考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度实验目的学习考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理和方法。实验原理考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度是利用蛋白质与染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法。考马斯亮蓝G250存在两种不同的颜色形式，红色和蓝色。它考马斯亮蓝通过范德华力与蛋白质结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律。结合后染料颜色由红色形式转变成蓝色形式，最大光吸收由465nm变成595nm，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白的量。蛋白质和染料结合是一个很快的过程，约2分钟即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定1小时。之后，蛋白-染料复合物发生聚合并沉淀出来。测定蛋白质浓度时灵敏度很高，比Lowry法灵敏4倍，测定范围为10-100ug蛋白质，微量测定范围是1-10ug蛋白质。此法重复性好，精确度高，线性关系好。此方法干扰物少。研究表明NaCl,KCl,MgCl2,乙醇,(NH4)2SO4无干扰。强碱缓冲剂在测定中有一些颜色干扰，这可以用适当的缓冲液对照扣除其影响。