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能使红细胞完全凝集的病毒的最高稀释倍数为该病毒的血凝效价,此效价为1个血凝单位（HAU）第二节病毒的分离与鉴定病毒颗粒红细胞病毒抗体血凝抑制试验病毒液中若先加入病毒的特异性抗体,抗体与病毒表面的抗原特异性结合,从而抑制病毒与红细胞的血凝现象,称为血凝抑制试验。第二节病毒的分离与鉴定2.中和试验（Nt）在体外孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，经培养后观察CPE或红细胞吸附现象是否消失，即特异性抗体是否中和相应病毒，从而测定残存的病毒感染力的一种方法3.空斑形成试验第二节病毒的分离与鉴定是一种检查和准确测定病毒滴度的方法。将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后,再覆盖一层融化的半固体营养琼脂,使病毒在单层细胞培养中有限扩散。结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料(如中性红)染色,则活细胞着色,受病毒感染而破坏的细胞不着色,形成肉眼可见的空斑/蚀斑(plaque)。每个蚀斑是由一个感染性病毒颗粒形成的,称作空斑形成单位(plaqueformingunit,PFU)。病毒悬液中的感染性病毒量的滴度可用PFU／ml表示。《微生物学检验》国家卫生和计划生育委员会规划教材《微生物学检验》国家卫生和计划生育委员会规划教材《微生物学检验》国家卫生和计划生育委员会规划教材国家卫生和计划生育委员会规划教材第十七章

病毒检验技术本章内容第一节标本的采集、处理与运送1第二节病毒的分离与鉴定2第三节病毒学检测及诊断3学习目标及重点学习目标:掌握病毒标本采集和送检应遵循的原则；病毒检验鉴定常用技术熟悉病毒血清学诊断常用的方法了解病毒感染的实验室快速诊断学会病毒的培养基本操作本章重点:★病毒标本采集和运送原则。★病毒学诊断及鉴定常用方法。★病毒培养的基本操作。病毒学检验技术是用实验室检验方法对临床和流行病学现场送检的标本（如人或宿主的血液、组织、尿、粪便和组织液等）进行病毒学的定性和定量分析,为病毒感染和病毒性疾病的诊断、治疗和预防提供科学依据。检验程序包括标本的采集、分离培养鉴定、快速诊断。第一节标本的采集、处理与运送一、标本的采集与处理1.采集时间:发病早期或急性期尽快采集。很多急性病毒感染，症状出现前病毒已经开始释放，症状初期病毒量即迅速达到峰值，之后平缓下降至疾病痊愈，不过也有例外。第一节标本的采集、处理与运送一、标本的采集与处理2.采集部位:取决于临床症状和所怀疑感染的病毒。从病原体入侵部位取材从病原体感染的靶器官取材根据病原体的排泄途径取材从环境中采集标本如:流感病毒感染------鼻咽拭子乙型脑炎病毒感染------脑脊液轮状病毒感染------粪便乙型肝炎病毒感染------血液第一节标本的采集、处理与运送一、标本的采集与处理3.采集方法与处理提高病毒的分离率,防止标本污染。采集时无菌操作,可加入抗生素以杀死杂菌二、标本的运送与保存1.标本的运送尽快送检冷冻、冷藏运输防漏、专人、标记2.标本的保存-70℃可较长时间保存可加入甘油或二甲基亚砜（DMSO）、Hanks液或小牛血清等以防病毒失活第一节标本的采集、处理与运送不同的病毒分离时采用不同的分离方法,这主要取决于目的病毒的生物学特性。主要有细胞培养法、鸡胚培养法、动物接种法等,而对细胞、鸡胚不敏感,又没有合适动物模型的病毒,可采用基因克隆的方法。第二节病毒的分离与鉴定一、病毒的分离培养2.鸡胚培养第二节病毒的分离与鉴定原代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞羊膜腔接种尿囊腔接种卵黄囊接种绒毛尿囊膜接种组织细胞培养鸡胚培养动物接种是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称,为病毒分离鉴定中的最常用的基本方法。（一）组织细胞培养鸡成纤维细胞Hep-2细胞细胞培养瓶Vero细胞第二节病毒的分离与鉴定1.原代细胞原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数。2.二倍体细胞是指原代细胞在体外分裂50代以后仍能保持其二倍染色体数目。二倍体细胞株来源于正