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农质发（2014）5号文件磺胺类药物

农质发〔2014〕5号文件附件8

磺胺类药物在动物可食性组织中残留的

高效液相色谱检测方法

1范围

本标准规定了动物组织中五种磺胺类药物（磺胺二甲基嘧啶、磺

胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹噁啉）残留检

测的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于猪肉中五种磺胺类药物残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是

注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修

订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究

是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版

版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

３原理

样品经乙腈提取后，在上清液中加入正己烷进行液液分配，取下

层溶液浓缩，残留物用95%乙腈溶解，过碱性氧化铝小柱,以70%乙

腈溶液洗脱，加入正丙醇浓缩后，残留物用流动相溶解，高效液相色

谱仪进行检测，外标法定量。

４试剂和材料

以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合

GB/T6682规定的二级水。

4.1磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺二甲基嘧啶（SM2）、磺胺

甲噁唑（SMZ）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺喹噁啉（SQ）对

照品：含量均不得少于98.0%

4.2乙腈色谱纯

4.3甲醇色谱纯

4.4正已烷

4.5冰乙酸

4.6正丙醇

4.7无水硫酸钠

4.895%乙腈溶液取乙腈95mL加水至100mL，混匀。

4.970%乙腈溶液取乙腈70mL加水至100mL，混匀。

4.10磺胺类药物标准储备液（1mg/mL）：分别准确称取适量上

述五种磺胺类药物对照品，置同一棕色容量瓶，加甲醇溶解并稀释至

刻度，摇匀，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液。-20℃以下冰箱

中保存，有效期6个月。

4.2.10磺胺类药物标准工作液（10μg/mL）：精密移取磺胺类药

物标准储备液1.0mL，置100mL棕色容量瓶，用甲醇稀释至刻度，

摇匀，即得。-20℃以下冰箱中保存，有效期1个月。

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪（配紫外检测器）。

5.2分析天平感量0.00001g。

5.3电子天平感量0.01g。

5.4旋转蒸发仪

5.5固相萃取装置

5.6碱性氧化铝小柱2g/6mL或相当者。

5.7离心机

5.8鸡心瓶100mL。

5.9匀质器

5.10旋涡混合器

5.11超声波仪

5.12微孔滤膜（0.45μm）

4.4测定步骤

6试料的制备与保存

6.1试料的制备

取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，绞碎并使匀质。

——取均质的供试样品，作为供试试料。

——取均质的空白样品，作为空白试料。

——取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白

添加试料。

——取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白

添加试料。

6.2试料的保存

上述制备的样品-20℃以下保存。

7测定步骤

7.1标准曲线的制备

分别准确量取磺胺类药物标准工作液适量，用流动相稀释成浓度

为0.05、0.1、0.5、1.0、5.0μg/mL系列混合标准溶液，由低浓度到

高浓度供液相色谱仪测定。以峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度

为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。

7.2提取

称取试料5（±0.05）g于50mL离心管中，加入无水硫酸钠4g，

乙腈15mL，以10000r/min

以上的速度均质60s后，以3000