DB34T 2850-2017 番鸭细小病毒PCR检测方法.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T2850—2017

番鸭细小病毒PCR检测方法

DetectionMethodofMuscovyDuckParvovirusbyPCR

2017-03-30发布2017-04-30实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T2850—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、安庆永强农业科技股份有限公司。

本标准起草人：戴银、潘孝成、胡晓苗、张丹俊、黄永强、赵瑞宏、周学利、侯宏艳、沈学怀、胡

业和、夏生林、吴娟、王骏俊、朱传民。

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DB34/T2850—2017

番鸭细小病毒PCR检测方法

1范围

本标准规定了番鸭细小病毒的PCR检测方法。

本标准适用于番鸭肝脏、脾脏、胰腺病变组织、番鸭胚尿囊液中番鸭细小病毒核酸的检测。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

2.1

番鸭细小病毒MuscovyDuckParvovirus，MDPV

属于细小病毒科、细小病毒亚科、依赖病毒属，基因组为线性、单链DNA。

3检测方法

3.1仪器

3.1.1PCR仪扩增仪。

3.1.2台式低温高速离心机，温控范围：-4℃~25℃。

3.1.3电泳仪，电压范围：60-120V。

3.1.4凝胶成像系统。

3.1.5冰箱。

3.1.6微波炉。

3.1.7水浴锅，温控范围：37℃~100℃。

3.1.8微量移液器，可调量程：0.5～10ul，10～100ul，100～1000ul。

3.2试剂和材料

3.2.1细胞裂解液，见附录A中的A.1。

3.2.2酚、氯仿、异戊醇、异丙醇、乙醇。

3.2.3蛋白酶K。

3.2.4灭菌双蒸水。

3.2.5TaqDNA聚合酶。

3.2.6dNTP。

3.2.7DNA分子量标准：DL2000DNAMarker。

3.2.8溴化乙锭（EB，10µg/µL）或核酸染料。

3.2.9磷酸盐缓冲液（PBS，0.01mol/L，pH7.2），见附录A中的A.2。

3.2.1050×TAE电泳缓冲液，见附录A中的A.3。

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3.2.111％琼脂糖凝胶，见附录A中的A.4。

3.2.121×TE缓冲溶液，见附录A中的A.5。

3.2.13根据番鸭细小病毒的基因组序列保守区，设计1对特异性引物：上游引物5’-

GCTCTTTGCTTCAGTTGCTC-3’，下游引物5’-ACTTGCTTCTCCTCCACTAT-3’。扩增基因片段长度为861bp。

3.2.14阳性对照样品：MDPV接种的番鸭胚尿囊液；阴性对照样品：未接种的正常番鸭胚尿囊液。

3.3操作步骤

3.3.1样品的采集及处理

a)采样工具

——15mL离心管、1.5mL离心管、剪刀、镊子和研钵，