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血红蛋白电泳操作规程

血红蛋白电泳操作规程

一．项目名称

血红蛋白电泳（HYDRAGELHEMOGLOBIN）

二．检验方法名称

琼脂糖凝胶区带电泳

三．方法学原理

血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不

同的血红蛋白，其表面电荷不同，在电场中的泳动率不同，这还与pH、电泳缓冲液的离子

强度等有关。血红蛋白异常有二种类型：血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。

血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常，称之为地中海贫血。实验使用洗涤

过红细胞的溶血液来进行，在碱性的凝胶片上进行电泳来分离血红蛋白，分离出来的片段

通过氨基黑染色剂来显色，烘干后的凝胶片就可以用来解释结果了。

四．方法学溯源

自1930年由Tiselius发现了移界电泳（movingboundaryeectrophoresis），而后，这

种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zoneelecrrophoresis）所克服，区带电泳的条

件和支持介质的选择是电泳成败的关键。

五．仪器

（一）型号：SEBIAHYDRASYS(PN1210)

（二）分析和计算参数：

1．处理量：约45个样本/小时

2．所需样本量：10ul

3．检验时间：约半小时

4．重复性：有良好的批内和批间重复性

5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）

电流0－500mA

功率0－100W

六．试剂及配套品

（一）试剂

1．HYDRAGEL7HEMOGLOBIN（E）试剂盒

HYDRAGEL15HEMOGLOBIN（E）试剂盒

（1）商标：SEBIA

（2）包装规格：70测试/150测试

（3）货号：PN4106/PN4126

2．脱色液

（1）商标：SEBIA

（2）包装规格：Packfor10×100ml

（3）货号：PN4540

1

血红蛋白电泳操作规程

(4)成分：柠檬酸

3．洗涤液

（1）商标：SEBIA

（2）包装规格：Packfor10×80ml

（3）货号：PN4541

（4）成分：叠氮钠

4．生理盐水

（二）配套品

血红蛋白质控

（1）商标：SEBIA

(2)包装规格：Packfor1×1ml

(3)货号：PN4791

七．操作步骤

㈠开机，启动电泳仪。

㈡将加样梳置于平板上，有数字的一端向上，在2分钟内完成每块加样梳的加样，每孔

加10ul样品，然后齿梳向上把加样梳放于湿盒内5分钟。

㈢选择“7/15Hb”电泳程序。当预期HYDRAGEL7/15HEMOGLOBIN(E)凝胶片上出现HbF

和HbS，为了更好的分离，推荐使用“7/15HbF-S”电泳程序。

㈣从包装袋内取出缓冲条，将其固定在电极支架背侧的钉上，再取出凝胶，用薄滤纸快

速轻轻地吸去凝胶表面多余的液体，在温控板表面下1/3处加120μl[HYDRAGEL7

HEMOGLOBIN（E）]或200ul[HYDRAGEL15HEMOGLOBIN（E）]蒸馏水或去离子水，将凝胶片

底边紧靠框架底边，边缘对齐边线，略弯曲凝胶片慢慢放平，注意凝胶片下面勿出现气泡。

㈤自然放下支架，从湿盒中取出加样梳并去除齿梳下的保护支架，“7/15Hb”电泳程序时，

将加样梳放在4号位置，“7/15HbF-S”电泳程序时，将加样梳放在3号位置。注意点样

梳