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免疫组化操作步骤

第一节免疫组化操作步骤及抗原修复《〈供参考)

第二节免疫组化抗原热修复的技术要点〈供参考)

(一)、仪器设备

1.18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.

2.水浴钢

(二)、试剂

1.PBS缓冲液〈pH

7.2一

上

2.

0.01molWL柠檬酸钠缓冲液〈CB,pH

6.0,1000ml)

3.3%甲醇一H

20

2溶液;

用30%H

20

2和80%甲醇溶液配制

4.风写剂;

a.甘油和

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0.5mmo/碳酸盐缓冲液〈pH

9.0-

9.5)等量混合b油和TBS{PBS)配制

5.TBS/PBSpH

9.0-

9.5,适用于荧光纤维镜标本;pH

7.0-

7.4适合光学纤维标本

(三)、操作流程

1、脱蜡和水化:

脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60它恒温箱中烘烤20分钟。

a组织芯片置于一甲茉中浸泡10分钟,更换一甲茉后在浸泡10分钟

b无水乙醇中浸泡五分钟

c95%乙醇中浸泡五分钟

d75%乙醇中浸泡五分钟

2、抗原修复;

用于福尔马林固定的石蜡包埋组织世片;

抗原修复〈免疫组化石螨切片)

用才福尔马林辕定的石螨包埋组织芯片需要抗原修复

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福尔马林固定的组织有可能破坏了虚来组织的抗原结构，和蛋白多肽发生父

联，导致部分抗原表位封闭，结合位点减少，所以需要抗原修复，以竖露原来

的抗原表位，达到充分显露抗原，以不出现明显脱片现象为佳。

抗原修复的几种常用方法〈供参考)

1,微波炉加热:

在微波炉里加热

0.01枸宪酸钠缓冲液(pH

6.0)全沸腾后将组织世片放入，断电，问隔5-10分钟，反复1-2次。根

据玻片情况可参考采用微波加热“3-5-3法3分钟温火沸腾后静上小5分钟，再温

火沸腾3分钟即可。

适用的抗原:

米源于人、大鼠、小鼠的纽织标本:米源于其他动物种属的纽织标本:

2.沸热修复;

电炉或水浴锅加热

0.01M枸构酸钠缓冲液pH

6.0)至95它左右，放入组织蕊片加热10-15分钟。

3,高压热修复:

在沸水中加入EDTA(pH

8.0)或

0.01m析檬酸钠缓冲溶液pH

6.0).盖上不锈钢锅盖，但不能锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加

压，使玻片在缓冲液中浸泡五分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10

分钟后除去热源，置入凉水中，当小阀门滴下去后打开盖子。此方法适用于较

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难检测或核抗点的抗诛修复。《〈骨及软骨组织的标本最好选择较温和的微波加

热修复)

4.酶消化方法:

常用

0.1%胰