免疫组化操作步骤41413.pdf

免疫组化操作步骤

第一节免疫组化操作步媒及抗原修复《供参考》

第二节免疫组化抗原热修复的技术里点【供参考》

(一)、仪器设备

1.18cm不锈钢高压锅或电炉或用徽波炉-

2.水浴锅

(一)、试剂

1.PBS缓冲液(pH7.2一7.4)

Er

3.3甲醇一HO;深液:用30%H9;和80名甲醇溶液配制

4风寝剂:a.册油和05mmolfL碳酸盐缓冲液pH9.0-9.5)等量混合b油和TBSPBS)饥制

5.TBS/PBSpH9.0-9.5,适几于荧光纤维镜标水;PH7.0-7.4适合光学纤维标本

《二)、操作流程

1、脱蜡和水化，脱蜡前应将组织世片在室温中放置60分钟或60恒过箱中烘烤20分钟。

a组织芯片稼于一甲匠中浸泡10分钟,更换一甲苯后在浸泡10分钟

b无水乙醇中浸泡五分钟

c95和%乙醇中汉泡五分钟

d75色乙醇中浸泡五分钟

2、抗原修复;用于福尔马林辐定的石蜡包坦组织艺片:

抗原修复《免疫组化石蜡切片7

用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片需要抗原收复

福尔马朵固定的组织有可能破坏了原来组织的抗原结构,蛋白多肽发生交联,导数部分抗原表

位封闭，结合位点减少,所以需要抗原修复，以暴露原来的抗原去位，达到充分显露抗原，以不

出现明显脱片现象为侍。

抗原收复的几种常用方法〈供参考)

1.微波炉加热:在微波炉里加热0.01构构皮钠缓冲液(pH6.0)至沸腾后将组织世片放入，晰

电，间陋5-10分钟，反复1-2次。根据玻片情况可参考采用微波加热3-5-3法3分钟温火沸腾

后静止5分钟，再湿火沸腾3分钟即可。

适用的抗原;来源十人、大鼠、小鼠的组织标本;来源十此他动物种属的组织标本:

2.沸热修复电炉或水浴锁加热0.01M构杰酸铀缓冲液pH6.0)至%左布，放入组织芯

片加热10-15分钟。

3.高正热收复:在沸水中加入EDTADpH8.0)或001m构梅酸钠缓冲溶液《pH6.0).盖上不锈

钢锅盖，但不能锁定。将玻片置本金属染色架上，缓慢加频，使玻片在缓冲液中诅泡五分钟，然

后将盖了锁定，小阅门将会才起来。10分钟帮除去热源，置入凉水中，当小阀门沉上去后打间

盖子。此方法适用于较难检测或核抗原的抗襄修复。《骨及软骨组织的标本最好选择较温和的微

波如热修复?

4.酯消化方法:

常用0.1%琵浅跨酶入4%胃绩丫酶液。且入扬酶使用前预热37C，消化时间约为5-30分钟。

适用于被固定多贞的抗原:

包括Collagen.GFAP.ComplementCytokeratin.c-erB-2.LCALN.等

石螨切片免疫组化染色步骤

1.二步法〈以SP试剂盒为例)

e石螨训片脱旺全水。

e蒸馏水冲洗，PBS汉泡5分钟，如果采用抗原修复，可在此步后