降低植物组培苗的污染方法.pdf

摘要：控制污染是植物组培苗工厂化生产中重要的技术环节，本文从外植体消毒、操作污

染和环境污染、继代培养中污染的防治、减少培养基中的有机成分等方面讨论了减少污染的

措施和方法。

关键词：组织培养污染防治方法

植物组培苗的工厂化生产在我国发展速度很快，组织培养技术日趋完善，在市场竞

争中，如何降低成本是提高经济效益的首要问题，组织培养中污染率的增加势必引起组培苗

成本的提高，经济损失很大。因此,组织培养中降低污染率是工厂化生产中不可忽视的技术

环节[1]。植物组织培养过程中造成污染的原因是多方面的，应根据具体情况从不同方面预

防解决。

1外植体的消毒

要尽量选取带菌少的材料，如果室外栽培的材料污染太严重，就要采取一些预防措

施：先将植物样本挖出，改为室内盆栽，喷布杀虫剂和杀菌剂，不便移栽的，可套塑料袋，

等它们长出新枝条后，再行采样接种。邢震等对比野外直接采用外植体和经室内黄化处理的

外植体组织培养效果分析发现，经黄化处理的外植体污染率低，但分化明显没有野外直接采

用的外植体强[2]。先对材料进行低温预处理也有利于降低污染率，于福科等把刚采回的玫

瑰枝置于冰箱7d后，选取带芽茎段培养，并与未经低温处理的材料作对照，发现低温处理

后的材料，污染和褐化均有不同程度的降低，且带芽茎段的萌动也明显提早。这可能与杂菌

或某些酶的活性在低温下受抑制或被冻结有关[3]。高成伟等在夏橙的组织培养中用10ｍｇ/

Ｌ培福朗溶液预处理56ｈ接种枝条也取得了较好的消毒效果[4]。

外植体消毒常用药剂有：70%～75%的乙醇溶液，0.3－0.6％的次氯酸钠溶液和0.1%

的升汞溶液。选用何种灭菌剂和灭菌时间根据操作者的经验来掌握，既要求将外植体表面的

微生物彻底杀死，又要求尽可能少伤害外植体组织和表层细胞。先用75％的酒精棉花擦拭

外植体材料再使用消毒药剂常能取得较好的消毒效果，尤其对有毛的材料。周俊辉等对玛丽

安万年青采用减压灭菌，利用减压抽走植物组织中的气体使消毒剂更易进入植物内部，从而

增强杀菌效果，使污染率从对照的93.3%降低到40.0%[5]。

对污染严重的外植体，尤其由内源细菌引起的污染，无论用何种表面消毒方法都不

能彻底消除，可以在培养基中加入杀菌剂。冯晓英在勿忘我的组织培养中发现苯甲酸钠对初

代培养中的细菌和霉菌污染的抵抗力较山梨酸钾、庆大霉素和对照的强，并且外植体的分化

率也较高[6]。周俊辉等对细菌抑制的实验表明，丙酸钠、磷酸钠均能耐高温高压，0.3%的

丙酸钠有较好的抑菌效果，在应用于美铁芋的快速繁殖上，发现0.5%的丙酸钠对外植体的

生长影响不大[7]。

2操作污染和环境污染

与外植体自身带菌所产生的污染相比,操作污染和环境污染是可以克服的。真茵污染

主要来源于环境,细菌污染主要来源于接种材料及工具。防止污染的主要措施是：(1)改善

环境条件。接种室与培养室要定期做好消毒与净化，接种前工作台或接种箱要开紫外灯

30min以上。培养室的相对湿度应控制在70％左右，相对湿度太高时可以用抽湿机抽湿。（2）

接种人员的培训很关键，应严格执行无菌操作，对接种中所需的工具，必须经严格灭菌后才

能使用。在超净工作台的操作区内，不要放入过多的待用材料，避免气流被挡住。还要定期

检查超净工作台的工作质量[8]。(3)严查接种材料。淘汰被真菌与细菌污染的接种材料。（4）

经常检查消毒锅的灭菌质量，若发现问题要立即检修。消毒锅的压力表降到零后不能马上出

锅，因冷热空气作用产生的负压效应，使外界环境的冷空气倒吸入已灭菌的培养瓶内引起真

菌污染，为避免该现象的发生，消毒后培养瓶应待锅内稍冷却后才出锅[9]。（5）检查培养

容器是否存在问题。培养容器封口多用塑料盖、胶塞、棉塞、薄膜等，塑料盖用久了易老化，

密封性差，也会造成污染。林盛等配制了一种“4号消毒液”对培养瓶瓶口进行消毒处理，可

以把培养基污染率控制在0.3％以下[10]。

3继代培养中污染的防治

初始阶段所获得的无菌材料理论上是无菌的，但在后期或继代培养中也会出现污染，

这除了操作不慎带菌外，继代材料在培养室也可能被螨传播的真菌污染。这类污染可从两方

面防止：（1）扩大繁殖时应有合理的程序。在获得了最初的无菌培养物之后应将其中一部分

作为“原种”保存起来，分批繁殖和复检后再提供给大规模生产。（2）可通过在培养基中加入

抗