小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验.pptx

;单核细胞存在于外周血液中，巨噬细胞广泛分布在各种组织中，可以从腹腔渗出细胞、骨髓、脾脏、淋巴结、胸腺、肝脏以及肺等组织中分离获得。

正常小鼠每只可收集腹腔渗出细胞约106，其中巨噬细胞占30%。如果给小鼠腹腔注射某种刺激物，可使巨噬细胞渗出增加，易于分离更多的巨噬细胞。;刺激物;试剂（每组）：

印度墨汁（5%）1ml/室

1640培养液（5%FCS)2ml/组

生理盐水1瓶/组

;实验前2天，给小鼠腹腔注射5％淀粉溶液１ml（已完成）。

颈椎脱臼处死小鼠，剪开小鼠腹部皮肤，用镊子提起腹膜，用剪刀剪开一小口，用1ml加样器向腹腔打入2ml培养液，反复冲洗腹腔，吸出腹腔液放入EP管中。

每组取2张载玻片，做标记。每张分别加两滴100ul腹腔液，其中一滴加5ul墨汁，置湿盒中，37度孵育1h。用生理盐水洗掉未贴壁细胞和墨汁，盖好盖玻片后，显微镜下观察，计数。;用40倍镜查找观察100个巨噬细胞，计数其中未吞噬墨汁的巨噬细胞数、吞噬了墨汁的巨噬细胞数，计算吞噬百分率。

吞噬百分率:

有吞噬作用的巨噬细胞数／100×100％;7;8;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬

鸡红细胞试验;试剂（每组）：

2％鸡红细胞悬液1ml

Giemsa－Wright染液1EP管

生理盐水1瓶

苦味酸1瓶

;实验前2天，给小鼠腹腔注射5％淀粉溶液１ml（已完成）。

用1毫升注射器给小鼠腹腔注射3％鸡红细胞悬液0.5ml，用苦味酸做好标记后放回笼中；60min后脱颈椎处死小鼠。

剪开小鼠腹部皮肤，用镊子提起腹膜，用剪刀剪开一小口，用1ml加样器向腹腔打入2ml生理盐水，吸出腹腔液放入EP管中。

用20ul加样器吸取20ul腹腔液滴到载玻片上，再加入20ulGiemsa-wright染色液，上面盖好盖玻片后，显微镜下观察。;用40倍镜查找观察100个巨噬细胞，计数其中未吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数、吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞数及被吞噬的鸡红细胞数，计算吞噬百分率及吞噬指数。

吞噬百分率:

有吞噬作用的巨噬细胞数／100×100％

吞噬指数:

有吞噬作用的巨噬细胞吞入的鸡红细胞总数／100;13;14;

抗体依赖细胞介导的细胞毒试验（ADCC）

补体依赖的细胞毒试验（CDC）

细胞介导的细胞毒试验

NK细胞介导的细胞毒试验;抗体依赖细胞介导的细胞毒试验（ADCC）;;补体依赖的细胞毒试验（CDC）;;细胞介导的细胞毒试验;;NK细胞：无需抗原预先致敏就能杀伤靶细胞的大颗粒淋巴细胞、对肿瘤细胞及某些病毒感染的细胞具有明显的杀伤作用。

NK细胞杀伤方式：

１.直接接触启动杀伤：NK细胞一旦与靶细胞结合后，即可被活化发生细胞内颗粒重排，释放NK细胞毒因子、穿孔素等物质破坏靶细胞。

２.ADCC作用杀伤靶细胞。;23;形态学检测方法

同位素释放法

酶释放法;25