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RNA提取的操作步骤

准备试剂:氯仿,异具醇,75%%乙醇,励RNasc的水或0.5%SDS(溶液均需用DFPC

处理过的水氏制)

操作步骤:

1，匀桨处理:a.组织将组织在液气中磨碎,每50-100mg组织加入lmlTR1zol，

用匀浆仪进行匀浆处理。样目体税不应超过TRIzol体各10%。

b.单层培养细胞直接存培养板中加入TRTzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm

站径的培养板)加lm1，用移滚器吸打几次。TRIzol的用基应根据培养板面积而

定，不取雇于细胞数。TRIzol加只不号可能导致提取的RNA右DNA污染。

c.细胞悬液离心收集细胞，人个5-10X106动物、杆物、酵母细乃或1X107细

菌细胞加入lmlTRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降

解。一些酵从和细菌细胞需用匀浆仪处理。

2.将匀浆样品在室温〈15-30C)放置5分钟，使核酸蛋方复合物完全分讽。

3.可选步骤:如样品中含有较多入白质，脂肪，多糖或胞外物质〈肌肉，植物

结节部分等)可于2-8C10000Xg离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包

括细胞外膜，多糙，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有

大基油脂应去除。取澄清的勾桨液进行卜“步操作。

5.每使用lmlTRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振功15秒，室温放党3分钟。

6.2-8C10000Xg光心15分钟。样品分为三层，底层为黄色有机相，上层为无

色水相和-个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60

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后。用午丙醇沉演水相中的RNA。每使用lmlTRIzol加入0.5ml并两醉，宗沁

放曾10分钟。

8，2-8C10000Xg网心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，岗心后在管侧和管底

出现胶状沉深。移去上清。

上EE每使用lmlTRIzol至少加lml75%乙醇。2-8C

不超过7500Xg讽上清。

10.宗温放置干焕或真空抽二RNA沉淀，人约晾5-10分钟即可.不要真空离心干

燥，过于王燥会导致RNA的深解性大大降低。加入25-200u1无RNase的水或

0.5%SDS,用枪头吸打儿次,55-60C放置10分钟使RNA溶解.如RNA用本了切反

应,幼使用SDS浴液。RNA也可用100多的去离了了甲酰胺溶解，-70C保存。

注意事项:

1.从少芋样品〈1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可如入少许糖诛以

促进RNA沉淀。例如加800mlTRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10ngRNase-free

糖愿。糖原会与RNA一同沉演出米，糖原浓度不高本4mg/ml是不影响第一链的

合成，也不影响PCR反应。

2，匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70保在至少一个月。RNA沉淀可以保

存于75%酒