病毒学检验第二章鸡胚和动物接种技术.ppt

*病毒分离方法的比较方法应用价值存在问题动物接种应用最早；方法简便；结果易于观察自身带病毒；有的接种后不敏感；动物饲养问题鸡胚培养来源客观，易于管理，带病毒机会少；多途径接种敏感病毒谱窄细胞培养应用广泛，敏感病毒谱广设备技术要求条件高第133页,共134页，星期六，2024年，6月*感谢大家观看第134页,共134页，星期六，2024年，6月*鸡胚是正在发育的活体：组织分化程度低；细胞代谢旺盛；适于许多病毒的生长增殖，尤其是禽类病毒。鸡胚培养的优点：来源充足；价格低廉；操作简单，无需特殊设备；易感病毒谱较广；对接种的病毒不产生抗体。*鸡胚培养的缺点：非SPF鸡胚，可能含有某些家禽病毒的母源抗体，甚至还可能带有鸡白痢沙门氏菌、支原体、鸡白血病病毒、鸡贫血病毒等。***病毒材料直接感染内胚层，也可被鸡胚咽下引起全胚胎感染。病毒被排泄到尿囊腔。在用羊膜腔接种分离病毒时，除。*常用于牛痘病毒、天花病毒、单纯疱疹病毒的分离，这些病毒在绒毛尿囊膜上可形成肉眼可见的斑点状或痘疱状病灶。可在绒毛尿囊膜上进行上述病毒滴定，感染性病毒颗粒的数目可以通过产生的斑和痘的数目来计算。可用于上述抗体滴定试验，即在有抗体存在的情况下，痘疱形成受到抑制。***广泛用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适应和传代培养，病毒注射到尿囊腔后，在内皮细胞中复制，释放到尿囊液中。*接种方法选9－11日龄鸡胚照检后，标出气室边界和胚胎位置，在胚胎面气室上方靠近边界2－3mm处，避开血管作一标记。用碘酒消毒标记处的卵壳，在标记处钻一孔，再次用碘酒消毒钻孔区，将注射器针头经孔刺入尿囊腔，注入0.1－0.2ml接种物。将蜡熔化封孔，33℃－35℃孵育48－72小时。每日照检，24小时内死亡的应弃去。*解剖与收获收获前先将鸡卵置4℃冷冻6－18小时，如急于收获也可将鸡胚置-20℃1小时左右。冷冻后的鸡卵钝端向上置于卵杯上，将气室上方卵壳用碘酒或70%的酒精消毒后去除，暴露壳膜，用无菌镊子小心地将壳膜从绒毛尿囊膜上撕下，不要损伤绒毛尿囊膜。用注射器或吸管经绒毛尿囊膜刺入尿囊腔，吸出尿囊液，置低温保存。同时做无菌培养。*饲养于温、湿度恒定的屏障系统中，饲料、垫料、笼具等都要经过消毒处理，饮水应用高压灭菌或用pH为2.5～2.8的酸化水，工作人员应换灭菌工作服、鞋、帽、口罩等进入动物室进行操作。国际上此级动物仅适合于短期或部分科研实验；我国作为科研工作的主要要求的标准实验动物。*以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群，在不从其外部引入新个体的条件下，至少连续繁殖4代以上，称为封闭群，亦称远交群（OutbredStock）。①群体遗传特异性保持相对稳定；③个体间具有杂合性，存在一定的差异；③具有类似于人类群体遗传异质性的遗传组成；④繁殖生产能力较强；⑤生产成本低，生产量大，供应充足。尽量保持封闭群动物的基因异质性及多态性，避免近交系数随繁殖代数增加而上升过快。封闭群动物繁殖方法：繁殖时，随机的、以非近亲交配方式进行繁殖，保持每代近交系数上升不能超过1%。*1）遗传和表型上的均质性2）具有杂交优势3）具有同基因性4）国际上应用广泛*常用的方法有显微注射法、逆转录病毒载体法、胚胎干细胞介导法、精子载体法、电转移法、基因直接导入法等。*1．昆明小鼠(KM)起源：1926年美国Rockefeller研究所的DLclaralynch从瑞士同事手中得到2雄7雌白化小鼠，回去随机交配后分送各国称Swiss小鼠。我国在1946年从印度Haffkine研究所引进，飞机停留云南昆明时将Swiss小鼠饲养在昆明。在1952年将小鼠从昆明运到北京生物制品研究所。以后又分送上海、兰州、长春等地，我国全国各地几乎都是这批小鼠的后代。经各地区长期饲育繁殖，遗传特性略有差异，形成各自不同的封闭群。现在我国的昆明种大部分为封闭群，但也有此鼠进行纯化成功，如津白一号、津白二号、中国一号、昆明近交系(Km)等。1952年将小鼠从昆明运到北京生物制品研究所。以后又分送上海/兰州/长春等地，我国全国各地几乎都是这批小鼠后代。经各地区长期饲育繁殖，遗传特性略有差异，形成各自不同的封闭群。现在我国的昆明种大部分为封闭群，但也有此鼠进行纯化成功，如津白一号、津白二号、中国一号、昆明近交系(Km)等。*（三）实验动物常用的麻醉方法局部麻醉浸润麻醉：普鲁卡因、利多卡因全身麻醉乙醚吸入、戊巴比妥钠、氨基甲酸乙酯第101页,共134页，星期六，2024年，6