病毒感染力的滴定（TCID50的测定）实验操作步骤、计算方法.pdf

独可感染力的滴定〈TCID50的测定)控作步野、计和猎方法

一、实验目的

了解病毒感染力浏定的几种常几方法，掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操

作步又、计算方法及含义。

一、测定病毒感染力的方法

半数答死量LD50(50%lethaldose):用动物或鸡胚米检测

半数鸡胚感染量EID50(egg50%infectivedose)j:用鸡胚来检测

半数组胞培养物感染基TCID50(50%tissuecultureinfectivedose):用细胞米检测

蚀资形成单位〈plaqueformingunit，PFU)，川细胞来检测

荆、材料

1、长满单层的细胞1瓶

2、胰酶、吸奈、吸管、生长液

3、96孔细胞培养板

4、加样器、枪头

5、病毒液(PRV)

四、TCID50的操作步又

1、在吉需素瓶或岗心管中将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。

2、将稀释好的病毒接种公96孔微基培养板小每“稀释度接种“纵排共8孔,每

孔接种100bl。

3、在每孔加入细胞悬液100b1，使细胞量达到2~3x105个/ml。

4、设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。《100hl生长液+100HI细胞巧液》

5、逐日观察并记录结果，般需此观察5-7天。

6、结朵的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法

五、TCID50的计算方法

1、Reed-Muench两氏法

1、Reed-Eucnch了两氏法

病毒波和释出现CPE孔到二出现CPE孔所占

病栖禹释度数FFE数CPE扎数无CPE孔数的%

107180270100【27727)

10-28019昌100〔197197

10-3了二11194.6《117127

T0-43546台(居后】

105工了1130.7《174)

10r6e80210(0x217

CEE，Cytopathiceffect

让离比例=《高于50%病变率的百分数-50%4)/【《高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分娄

=《91.6-50)/《91.6-40)

=0.8

lgTCiD50=距高比例x稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数

=0.8X(-1)+(-3)

=-3.8

TCID50=1073.8/0.lml

含义，将该病毒稀释1038接种100ul1可使50%的细胞发生病变。

2、Karber法

2、Earber法

1gTCID50=L-d(s-0.5)

L最高稀释度的对数

D，稍释度对数之间的差

8，阳性孔比率总和

1gTCIDso=-1-1X(3.375-0,.5)

=-3.878

TCID50=10-3.875/0.1ml

含义;将该病毒和释103.875接种100hl可使50y的细胞发生病变。

含义将该病毒稀释103.875接种100hl可使50%的细胞发生病变。