口蹄疫全病毒基因工程疫苗及其制备方法 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN1602962A

(43)申请公布日2005.04.06

(21)申请号CN200410040389.9

(22)申请日2004.08.04

(71)申请人任兆钧;大理三达生物科技有限公司

地址650224云南省昆明市王旗营万发里14幢8单元4楼1号

(72)发明人任兆钧

(74)专利代理机构昆明正原专利代理有限责任公司

代理人金耀生

(51)Int.CI

A61K48/00

A61K39/135

A61P31/14

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

口蹄疫全病毒基因工程疫苗及其制

备方法

(57)摘要

本发明是一种口蹄疫基因工程疫苗

及其制备方法。其结构表达式为：全病毒

基因工程疫苗：phageT4－Soc－Hoc－

FMDV－P1；亚单位基因工程疫苗：

phageT4－Soc－Hoc－FMDV－F3。制备方

法是：取O血清型口蹄疫病毒毒株，抽提

总基因组RNA；从血清毒株的DNA测序

合成两个DNA核酸探针；用探针为引物，

进行RT－PCR链式DNA扩增反应，获得

病毒粒子P1基因；将P1基因与T4噬菌体

质粒pRH－Soc进行基因重组，得到T4噬

菌体整合质粒pRH－Soc－P1；将pRH－

Soc－P1与T4噬菌体载体phageT4－

ΔSocΔHoc进行同源重组，进入大肠杆菌

E.coli.CR63宿主菌体中，就得到本发明的

基因工程疫苗株phageT4－Soc－FMDV－

P1。本发明与灭活全病毒疫苗相比，不需

灭活，保持全病毒抗原性但不具传染性。

既可注射，也可口服，方便、快捷，免疫

效果良好。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

、一种口蹄疫基因工程疫苗1,其特征在于其结构表达式为:全病毒基因工程疫

苗:phageT4-Soc-Hoc-FMDV-P1;亚单位基因工程疫苗:phageT4-Soc-Hoc-FMDV-F3。

如权利要求2.1所述的口蹄疫基因工程疫苗的制备方法,其特征在于由以下的方

法获得:

取1)O血清型口蹄疫病毒毒株,用RNA抽提试剂盒抽提其总基因组RNA;

从2)O血清型口蹄疫病毒毒株的核酸DNA测序信息设计、合成以下两个DNA

核酸探针,使位于并覆盖口蹄疫病毒粒子表面全部结构蛋白基因的起、始位点为:

5’CTCAACGCAGAATGGAAAGCA3’

5’GGTCGAAGTTCAGAAGCTGTT3’

再用3)RT-PCR试剂盒,以抽得的口蹄疫基因组总RNA为底物,用以上探针为引

物,进行RT-PCR链式DNA基因片断扩增反应,获得口蹄疫病毒粒子全部外壳结构

蛋白完整的P1基因;

将4)P1基因与T4噬菌体外源蛋白高效表达展示系统的质粒pRH-Soc进行基因

重组,得到T4噬菌体整合质粒pRH-Soc-P1;

将5)pRH-Soc-P1与T4噬菌体展示系统的展示载体phageT4-ΔSocΔHoc进行

同源重组,转化进入大肠杆菌E.coli.CR63宿主菌体中,就得到了口蹄疫全病毒抗原蛋

白已表达展示在T4噬菌体表面的口蹄疫基因工程疫苗株phageT4-Soc-FMDV-P1;

根据3.权利要求2所述的口蹄疫基因工程疫苗的制备方法,其特征在于口蹄疫基

因工程疫苗的生产运用制备方法是:在LB培养液中大量扩增繁殖口蹄疫基因工程

疫苗株T4噬菌体phageT4-Soc-FMDV-P1,在中速离心机上