免疫组化操作步骤94055.pdf

免疫组化操作步骤

《一)、仪器设备

1.18cm不锈钢高所锁或山炉或用微波炉.

2.水浴锅

4和2》试剂

1.PBS缓冲液(ph7.2一7.4):NaC137mmolyL，KC12.7mmolL,Na2HPO44.3mmolL,KH2PO41.4mmol/L.

2，0.01mol/L柠术酸钠缓冲液〈CB.ph6.0,.1000ml)，柠楼酸三钠3g,柠檬酸0.4g。

3.0.5molLEDTA缓冲液(phg.0):700ml水小溶解186.1gEDTA8226;2H20J川10mmoYLNaOH调下pb8.0，

加水至1000ml.

4.1molL的TBS缓冲液(ph8.0):在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCI调全phg.0，加水1000ml。

5.酶消化液，a0.1%且注白酶，用0.1%CaCl12(ph7.8)配制。b.0.4%胃温和白酶液用0.IN的CI配制。

6.3%甲醇一H202溶液:用30%H202和80%外醉溶液配制

7.风衬剂，a.甘油和0.Smmol/L供酸趟缓冲液〈ph9.0-9.5)等虽混合b油和TBS(PBS)了配制

8TBS/PBSPH9.0-9.5,适川天芝光纤维镜标本;ph7.0-7.4适合光学纤维标本

(二)》、操作流程

1、脱蜡和水化，脱蜡前应将组织芯片在室温中放轩60分钟或60它恒浊箱中烘烤20分钟。

a组织必片置上:四共中浸泡10分钊,更换:忠举后在泛泡10分钟

b无水乙醇中浸泡五分钟

c95%乙醉中浸泡记分钟

d75%乙各中汉泡二分钟

2、抗原修偶:几于福尔乌林固定的右蜡包坦组织茧片:

A抗原热修复

复在沸水中加入EDTA(phg8.0)或0.01m构标肯钠缓冲溶液(ph6.0).就上不锈钢钢荔，但不能锁定。

将玻片冯于金属染色加上，缓慢加压，号玻片在缓冲液中浸泡五分钟，然后将赣了锁定，小阀门将会升起米。

10分钟后除去热小，置入谅水中，当小出门沉下去后打开盖子。此方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。

b浏热修复电炉或水浴锅加热001枸橡酸钠缓冲液(ph6.0)至95C左右，放入组织尾片加热10-15分钟。

微波炉加热在微波炉由加热0.01构栋酸钠缓冲液ph6.0)至沸腾后将组织芯片族入，断由，问隔5-10分钟，

反复12次。适用的抗原:Bcl-2.Bax.AR.PR.C-fosx-jumz-kitc-myc.E-cadherin.

ChromograninA,Cyclin.ER.Heatshock,Protein.HPV.Ki-67.MDMZ.P53,P34.P15,P-glycoprotein.PKC.PCNA,ras.Rb.等

B卫消化方法常用0.1%有峡蛋户旷和0.4%罚下广艇液。胰恒广艇使用诈预热37C，消化时间约为5-30分钟。

适用于被国定启项的抗瞩:包括Collagen,GFAPComplement.CytokeratinC-erB-2.LCA.LN.等

3、免疫细化染色SP法

(1脱晴、水化

(2)》PBS洗2-3次各5分钟

(3)3%H202(80%山醇)滴如在TMA上，室温萝置10分钟

(4)》PBS洗2-3次各5分钟

(5)抗原