c产品宿主残留量测定操作程序.pdfVIP

方法：

本标准操作程序主要使用QIAGENQIAampminiKit以离心柱法进行CHOg

（HamsterOvarygenomic仓鼠细胞组）标准品，Wako

Extractor®Kit以50%异丙醇沉淀法进行宿主残留（residual，r）回收，

®

TaKaRaSYBRPremixExTaq™(TliRNaseHPlus)进行产品r的qPCR（real-time

quantitativepolymerasechainreaction）定量分析。

适用范围：

本标准操作程序适用于由CHO细胞生产的产品中宿主残留量分析。

职责：

操作人员：

严格按照此规程要求进行操作。

岗位主管：

起草文件，并确保操作程序的准确性、技术内容的完整性及文件的及时更新；

监督操作规程是否与实际过程一致，资源是否满足要求；

培训，确保此操作规程的正确实施。

程序：

1术语解释

1.1CHO：仓鼠细胞

1.2g：组

1.3r：残留

1.4PCR：链式聚合酶反应

1.5qPCR：实时荧光定量PCR

1.6mix：反应预混液

1.7NTC：空白对照

2仪器设备

2.1移液器，0.5~10μl、2~20μl、10~100μl、20~200μl、100~1000μl

2.2pH计

2.3高速离心机

2.4漩涡混合仪

2.5电热恒温水浴锅

2.6超声波细胞机

2.7Nanophotometer

2.8电泳仪

2.9凝胶成像系统

2.10超净台

2.11刮板

®

2.12AppliedBiosystems7500FAST实时荧光定量PCR系统

2.13计算机

3耗材

3.1膜

3.22ml注射器

3.3EppendorfLoBind低吸附管，1.5ml

3.4吸头，10μl、200μl、1000μl

3.50.1ml96

3.6光学贴膜

3.715ml离心管

3.850ml离心管

4试剂

4.1dH2O，Gibco，15230-147

4.2无水乙醇

4.3QIAampMiniKit（见表1），QIAGEN，51304

表1

试剂货号

BufferALlysisbufferN/A

BufferAW1washbuffer1N/A

BufferAW2washbuffer2N/A

BufferAEElutionbufferN/A

ProteinaseK