细胞因子的检测和应用课件.ppt

生物学活性法免疫学检测法原理生物学活性水平特异性结合反应敏感性一般较高(受体)一般较低(加放大系统可明显升高)特异性低高(识别类型、亚型)(不能)(有可能)周期较长短培养条件大小指示细胞敏感性差异大/指示细胞突变可发生/生物学作用相同因子扰大小样品中特异性或非特异性抑制物干扰大小重复性较差较好标准化、大量检测困难容易细胞因子测定的临床应用原则应使用多种方法测定测定标本选择适当（血液、局部炎症分泌物、细胞、疾病的动态观察）同时测定多种细胞因子（了解T细胞、巨噬细胞、和上皮样细胞分泌细胞因子的功能）细胞因子测定的临床应用特定疾病的辅助诊断评估机体的免疫状态临床疾病的治疗应用临床疾病的预防应用发展历史和命名1966年-巨噬细胞移动抑制因子1969年提出了“淋巴因子”的概念此后，又提出了“单核因子”的概念(由于如此众多的免疫活性因子的发现，且鉴于对其本质尚不清楚，均以其生物学活性命名，致使这些因子的名称相当混乱。)1979年在瑞士召开的第二届淋巴因子国际会议上提出了白细胞介素的概念,并按发现顺序以阿拉伯数字排列。尚有其它细胞分泌的活性介质，如IFN-α和IFN－β分别由白细胞和纤维母细胞产生。目前将所有这些因子统称为细胞因子。概述概念细胞因子（cytokine）是指由活化的免疫细胞（包括淋巴细胞和非淋巴细胞）和某些基质细胞分泌的、介导和调节免疫应答及炎症反应的小分子多肽类因子，它们是除免疫球蛋白和补体之外的另一类非特异性免疫效应物质。产生细胞因子的细胞种类很多，但归纳起来主要有三类：①活化的免疫细胞，包括淋巴细胞、单核／巨噬细胞、大颗粒淋巴细胞、粒细胞、肥大细胞等；②基质细胞类，包括骨髓和胸腺的基质细胞、内皮细胞、上皮细胞、纤维母细胞、中枢神经系统的小胶质细胞等；③某些肿瘤细胞系。产生：抗原、致分裂原、感染、炎症等多种因素可刺激细胞因子的产生，各细胞因子之间也有相互刺激合成和分泌的作用。共同特点1)正常休止状态的细胞必须经刺激和活化后才能合成和分泌CKs,细胞内无细胞因子前体储存,接受刺激后从激活基因开始至合成,分泌,刺激结束后细胞因子的产生随即停止.。2）绝大多数CKs均为低分子量（4～80kD）的糖蛋白。3）分泌特性：大多数的CKs是通过旁分泌（paracrine），或自分泌（autocrine），少部分通过内分泌的形式作用于远处靶细胞或靶器官；4）多样性：一种细胞可产生多种细胞因子，不同类型细胞也可产生一种或几种相同的细胞因子。5）网络性：协同效应；重叠效应；拮抗效应。6）高效性：它们的受体亲和力高，表现很强的生物学活性，是免疫球蛋白等分子远不能及的。7)非特异性:细胞因子多由免疫细胞在特定抗原或丝裂原刺激下所产生,但其对靶细胞发挥功能却为非特异性,也不受MHC限制.3．分类白细胞介素（interferon）IL干扰素（interferon）IFN肿瘤坏死因子（TNF）集落刺激因子（CSF）生长因子（growfactor）GF趋化因子细胞因子检测受体检测技术生物学细胞增殖靶细胞杀伤趋化活性诱导产物细胞病变抑制分子生物学DNARNA检测ELISA免疫学流式细胞技术生物学检测法

(1)细胞增殖法依赖细胞株：许多细胞因子具有细胞生长因子活性，利用这一特性，现已筛选出一些对特定细胞因子起反应的细胞，并建立了只依赖于某种因子的细胞系，即依赖细胞株（简称依赖株）。这些依赖株在通常情况下不能存活，只有在加入特定因子后才能增殖。例如IL-2依赖株CTLL-2在不含IL-2的培养基中很快死亡，而加入IL-2后则可在体外长期培养。在一定浓度范围内，细胞增殖与IL-2量成正比。除依赖株外，还有一些短期培养的细胞，如胸腺细胞、骨髓细胞、促有丝分裂原刺激后的淋巴母细胞等，均可作为靶细胞来测定某种因子活性。3H-TdR掺入法原理：将3H-TdR作为DNA合成的原料掺入到新增殖的细胞中，细胞DNA合成的增加或减少而间接判断细胞增殖的方法，而用放射物质标记的胸腺嘧啶则可代表细胞DNA的增值程度，通过与细胞因子标准品比较，而推算出待测标本中细胞因子的含量。步骤：1．依赖细胞株的培养。用血细胞计数仪测定细胞密度，取适当体积的细胞用于测定。用基础培养液洗细胞两次后，测定细胞活力（应80%），并以测定培养液重悬细胞至合