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离子交换层析法(Ionexchangechromatography)
1.1基本原理:包括离子交换法的原理和步骤。
1.2.树脂材质:介绍常用的阴阳离子交换树脂成份。
2.3.离子交换剂的选择:如何选用适当的阴(阳)离子交换剂和缓冲液。
3.4.离子交换树脂的前处理:使用树脂前的注意事项和处理方法。
一、基本原理
离子交换层析法(ionexchangechromatography,简称IEC)是从复杂的混合物中,分
离性质相似大分子的方法之一,依据的原理是物质的酸碱性、极性,也就是所带阴阳离子的
不同。电荷不同的物质,对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力,改变冲洗液的离子强度和
pH值,物质就能依次从层析柱中分离出来。
离子交换层析法大致分为5个步骤:
1.1.离子扩散到树脂表面。
2.2.离子通过树脂扩散到交换位置。
3.3.在交换位置进行离子交换;被交换的分子所带电荷愈多,它与树脂的结合愈
紧密,也就愈不容易被其它离子取代。
4.4.被交换的离子扩散到树脂表面。
5.5.冲洗液通过,被交换的离子扩散到外部溶液中。
离子交换树脂的交换反应是可逆的,遵循化学平衡的规律,定量的混合物通过管柱时,离子
不断被交换,浓度逐渐降低,几乎全部都能被吸附在树脂上;在冲洗的过程中,由于连续添
加新的交换溶液,所以会朝正反应方向移动,因而可以把树脂上的离子冲洗下来。
如果被纯化的物质是氨基酸类的分子,则分子上的净电荷取决于氨基酸的等电点和溶
液的pH值,所以当溶液的pH值较低,氨基酸分子带正电荷,它将结合到强酸性的阳离子
交换树脂上;随着通过的缓冲液pH逐渐增加,氨基酸将逐渐失去正电荷,结合力减弱,最
后被洗下来。由于不同的氨基酸等电点不同,这些氨基酸将依次被洗出,最先被洗出的是酸
性氨基酸,如aparticacid和glutamicacid(在约pH3~4时),随后是中性氨基酸,如glycine
和alanine。碱性氨基酸如arginine和lysine在pH值很高的缓冲液中仍带有正电荷,因此这
些在约pH值高达10~11时才出现。
二、树脂材质
最常见的离子交换树脂材质是聚苯乙烯-苯二乙烯(polystyrenedivinylbenzene),它是
由苯乙烯(styrene)和苯二乙烯(divinylbenzene)聚合产生的三维网状结构,举例来说,
Dow化学公司所生产的树脂Dowex50×8,表示含8%苯二乙烯。
根据交换树脂的性能,分为阳离子与阴离子交换树脂。
1.阳离子交换树脂分为强酸型、中强酸型和弱酸型三类,强酸型树脂含有-R-
SOH,中强酸型树脂含有-POH、-POH或-O-POH,弱酸型树脂含有-COOH或
3322222
-OH。阳离子交换树脂进行的反应如下图一:
图一图二
2.阴离子交换
树脂
分为强碱型、中强碱
型和弱碱型三类,含有铵
盐,四级铵盐[-
+
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